姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制的研究

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目的:通过观察姜黄素对人胃癌细胞SGC-7901生长的影响、细胞周期改变及NF-κB、Livin、Caspase-3表达的变化,初步探讨姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的可能机制。方法:(1)将对数生长期的SGC-7901细胞,按每孔1000细胞加入到96孔细胞培养板中,接种容积为100μl;37℃、5%CO2条件下预贴壁12h后,分别加入浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L姜黄素溶液、DMSO溶剂对照组及培养基空白对照组各100μl,每个浓度设置5个重复孔,分别培育12h、24h、36h、48h、72h后,用CCK-8法筛选最佳药物浓度及作用时间;(2)设置空白对照组及20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L姜黄素浓度组,将对数生长期的SGC-7901细胞,按每孔5000细胞加入到6孔细胞培养板中,待细胞数量达到106/孔后,分别加入2m L1640培养基、20、40、60μmol/L姜黄素溶液,培育24h,用流式细胞仪测出各组细胞的细胞周期和凋亡率;(3)选取空白对照组及20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L姜黄素浓度组,提取各组细胞的蛋白,Western Blot检测各组SGC-7901细胞中NF-κB、Livin及Caspase-3等与胃癌细胞内抗凋亡与促凋亡蛋白表达量的变化。(4)本实验所有实验结果采用SPSS18.0统计并进行分析,对照组与实验组采用单因素配对样本的t检验,方差分析两组及两组以上数据结果。结果:(1)CCK-8检测结果:姜黄素药物浓度增加以及作用时间的延长,SGC-7901细胞的增殖活力值逐渐下降,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。Pearson关联性分析结果显示:与对照组比较SGC-7901细胞对不同浓度姜黄素具有剂量的依赖性(r=0.901,P=0.00<0.01)以及时间的依赖性(r=0.389,P=0.00<0.01)。(2)流式细胞仪检测胃癌SGC-7901细胞的周期:姜黄素作用于SGC-7901细胞的药物浓度的增加以及时间的延长,处于G1期的SGC-7901细胞数目明显增加,且S期的细胞数目均下降。FCM检测20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L姜黄素溶液对SGC-7901凋亡率较对照组差异具有显著性(P<0.05)。(3)Western Blot免疫印迹分析蛋白表达,加入姜黄素药物处理SGC-7901细胞,随着姜黄素浓度的增高,SGC-7901细胞内NF-κB蛋白同Livin蛋白表达水平逐渐降低,Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高。结论:1:姜黄素可明显抑制体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的增殖活力,促进胃癌细胞凋亡。其抑制细胞增殖与促进细胞凋亡具有明显的浓度及时间依赖关系;2:姜黄素可能影响胃癌SGC-7901细胞周期,并阻滞在细胞周期G1期;3:姜黄素可能通过下调SGC-7901细胞内NF-κB信号转导蛋白及Livin蛋白表达水平,激活Caspase-3蛋白表达,促进SGC-7901细胞凋亡。
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