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目的： 1.筛选出具有明显抗菌活性的海洋细菌和真菌菌株，并分析具有抗菌活性的海洋微生物菌株的生物多样性，为进一步从海洋微生物资源中发掘新型抗菌药物奠定基础。 2.建立海洋微生物胞外多糖筛选方法，筛选产胞外多糖的海洋细菌；发酵胞外多糖高产菌株，分离制备胞外多糖活性物质，并初步分析其理化特性，为进一步从海洋微生物资源中发掘新型免疫增强剂奠定基础。 方法： 1.采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌为测试菌，氨苄青霉素、青霉素-链霉素作阳性对照，分析测定海洋微生物分泌物的抗细菌活性；以白色假丝酵母菌、青霉菌、黑曲霉等为测试菌，制霉菌素作阳性对照，分析测定海洋微生物分泌物的抗真菌活性。 2.筛选出具有抗菌活性的海洋微生物菌株，用 ClustalX软件对海洋细菌16S rDNA和海洋真菌ITS1-5.8S-ITS2的PCR扩增测序结果进行分析而排除相似序列后，在GenBank网站用Blast进行相似性分析，用Phylip软件按照邻接法聚类构建系统发育树，从而对具有抗菌活性的海洋微生物进行分类和多样性分析。 3.分别采用添加蔗糖、苯胺蓝和钌红的方法，制备三种不同的胞外多糖筛选平板，分别对同一组海洋细菌中产胞外多糖的菌株进行筛选；采用微孔板培养和酶解醇沉法分离提取海洋细菌的胞外粗多糖，采用硫酸-蒽酮法测定胞外多糖含量；分析比较不同胞外多糖筛选平板的筛选结果，并据此建立起一种经济简便、快捷而可靠的海洋微生物胞外多糖的筛选方法。 4.筛选海洋细菌中胞外多糖高产菌株，选取产糖量最高的海洋细菌菌株Xmb27进行规模发酵，发酵液经旋转蒸发仪浓缩、透析袋透析、酶解醇沉等步骤获取胞外粗多糖，产物经阴离子交换分离柱纯化后，对其理化性质和体外抗氧化活性进行初步分析研究。 结果： 1.从本课题组已经鉴定收藏的106株海洋细菌中筛选出可产胞外抗菌活性的细菌菌株44株，占测试菌株总数的41.5%。其中，11株具备抗金黄色葡萄球菌作用，占测试菌株的11.4%，31株有抗枯草芽孢杆菌作用，占测试菌株的29.2%，13株具备抗大肠埃希菌作用，占测试菌株的12.3%；8株(xmb12, xmb52, xmb53, xmb54, xmb57, xmb63, xmb64, xmb65)对2种及以上指示菌有抑菌活性，其中6株同时具备抗G-和抗G+的双重作用。筛选出的44株可产生胞外抗菌活性的海洋细菌菌株分属于细菌的29种，分布于厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)2个门的3纲，6目，9科，13属，优势属为芽孢杆菌属(Bacillus)和弧菌属(Vibrio)。 2.从本课题组已经鉴定收藏的446株海洋真菌中筛选出产胞外抗菌活性的真菌菌株53株，占测试菌株的11.9%。其中，13株具有抗金黄色葡萄球菌作用，占测试菌株的2.9%；42株有抗枯草芽孢杆菌作用，占测试菌株的9.4%；10株有抗大肠埃希菌作用，占测试菌株的2.2%；4株(Xmf313、Xmf178、Xmf250、Xmf242)对2种及以上指示菌有抑菌活性，其中3株(Xmf313、Xmf178、Xmf242)同时具有抗G-和G+的双重作用。筛选出的53株产胞外抗菌活性的菌株分属于真菌的19个种，分布于子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)的4纲，5目，8科，10属，优势属为曲霉属(Aspergillus)。 3.96孔深微孔板法培养和提取出海洋细菌胞外多糖，用硫酸-蒽酮法测定多糖含量。106株被测海洋细菌的胞外多糖中，糖含量在150μg/mL以上的菌株有14株，占测定菌株的13.1%，糖含量最高的为454.81μg/mL。采用3种不同平板筛选106株海洋细菌胞外多糖的结果显示，苯胺蓝平板法的检出率最高，假阴性率最低，所以是用于初筛海洋细菌胞外多糖的较好方法。 4.利用酶解醇沉法从海洋芽孢细菌 Xmb27发酵液中提取出多糖,酶法除去蛋白质后，经透析浓缩得到胞外多糖粗品(CEPS)。通过 D301阴离子交换分离柱纯化得到两种均一性的多糖组分EPS-1和EPS-2。化学法测定出CEPS、EPS-1和EPS-2的总糖含量分别为57.23%、86.64%和19.41%，蛋白质含量分别为2.1%、18.7%、11.5%，糖胺聚糖含量分别为：8.8%、14.1%、23.72%，糖醛酸含量分别为5.0%、27.8%和6.6%，硫酸基含量分别为：0.08%、0%、3.2%，总氨基己糖含量含量分别为28%、15.45%、0.1%，氨基半乳糖含量分别为3.4%、23.19%、1.2%。 5.利用化学法测定海洋芽孢细菌Xmb27胞外多糖体外抗氧化活性，结果显示：海洋芽孢细菌Xmb27胞外多糖具有较强的清除·OH和 H2O2的能力，一定的DPPH·清除能力，较弱的O2-能力。在0～3 mg/mL的浓度范围内，随着多糖浓度的增加，抗氧化活性逐渐增强，按照由高到低的顺序依次是 EPS-2
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