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目的观察高三尖杉酯碱(HHT)和伊马替尼(IM)单用及两者联用对慢性髓细胞白血病(CML)细胞株K562及其耐药株K562/G01增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制。方法1.常规培养K562及K562/G01细胞株;应用不同浓度的HHT或IM对两细胞株进行处理;分别采用CCK-8法、流式细胞术和Western blot法检测经HHT、IM、HHT+IM处理24h后细胞的增殖活性、凋亡率及磷酸化酪氨酸(p-Tyr 及 p-Crkl)水平、p210Bcr-Ab1糖蛋白(p210)和PI3K/Akt/Fox03a通路相关蛋白的表达水平,以平均荧光强度(MFI)表示细胞的磷酸化酪氨酸水平。2.采用Western blot和qPCR法检测27例初诊CML患者单个核细胞及细胞株中ZFX基因mRNA及蛋白的表达水平;采用电穿孔法介导siRNA转染以沉默K562及K562/G01细胞ZFX基因表达,应用HHT或IM处理转染后的细胞,CCK8法检测其增殖活性。结果1.HHT联合IM对CML细胞增殖及凋亡的影响:IM联合HHT对K562及K562/G01细胞株的增殖抑制率显著高于不同浓度的IM单用组(P<0.05);与HHT或IM单用组相比,HHT联合IM处理显著增加了K562细胞的凋亡率(P<0.05),三组凋亡率分别为(8.1±1.4%)、(11.5±2.6%)和(22.8±2.1%);HHT联合IM处理K562/G01细胞后的凋亡率(29.3±3.2%)较HHT(9.5±1.6%)或IM(17.1±2.5%)单用组显著增加(P<0.05)。2.HHT联合IM对CML细胞p210蛋白表达及酪氨酸激酶活性的影响:HHT联合IM处理细胞后,K562及K562/G01细胞p210蛋白表达水平均显著低于HHT或IM单用组;HHT联合IM处理后K562细胞的MFI(p-Tyr:4.2± 1.6、p-Crk1:7.3±2.4)较HHT单用组(12.9± 1.2、23.0±1.9)或IM单用组(10.1±2.0、16.8±1.9)显著下降(P<0.05);与HHT(17.7±1.5、28.1±1.9)或IM(12.8±2.1、16.7±2.1)单用组相比,HHT联合IM(8.4±1.3、9.3±2.5)处理显著降低了K562/G01细胞的MFI(P<0.05)。3.HHT联合IM对CML细胞PI3K/Akt/FoxO3a信号传导通路的影响:HHT联合IM处理细胞后,K562及K562/G01细胞中PI3K、p-Akt及p-FoxO3a蛋白水平均较HHT单用组或IM单用组显著降低;而Akt总蛋白在各处理组中的表达无统计学差异。4.沉默ZFX基因对IM和HHT抑制CML细胞增殖作用的影响:K562/G01细胞ZFX基因的mRNA及蛋白表达水平显著高于K562细胞(P<0.05);与空白转染组相比,沉默ZFX基因表达可显著增强IM对K562及K562/G01细胞的增殖抑制作用(P<0.05)。不同浓度的HHT处理K562及K562/G01细胞后,ZFX基因的mRNA及蛋白表达水平均被显著下调(P<0.05);与ZFX siRNA转染组或HHT处理组相比,沉默ZFX基因表达可显著提高HHT增强IM对K562及K562/G01细胞的增殖抑制作用(P<0.05)。结论1.HHT可通过下调p210蛋白表达及其酪氨酸激酶活性和抑制PI3K/Akt/FoxO3a信号传导通路增强IM对CML细胞的增殖抑制及促凋亡作用;2.HHT可通过下调ZFX基因表达增强IM对CML细胞增殖抑制作用。