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目的:在前期研究中已证实OCT4B1诱导结直肠癌细胞发生EMT而获得干细胞特性,本研究探讨其调控机制。方法:在前期研究中已证实,通过悬浮培养的人结直肠癌肿瘤干细胞(SW480 CSCs)OCT4B1 m RNA水平较其亲本细胞(SW480)明显增高;采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SW480 CSCs中OCT4B1基因(SW480 CSCs-RNAi)后,与阴性对照组(SW480 CSCs-NC)比较,OCT4B1 m RNA水平明显降低,本研究对上述四组细胞作如下检测:(1)用RT-q PCR法及Western blot检测调控肿瘤EMT过程的指标PLK1m RNA及蛋白水平是否与OCT4B1呈相同趋势变化;(2)行mi RNA芯片检测,筛选与OCT4B1及PLK1变化趋势相反,且与PLK1存在结合位点的mi RNA;(3)用RT-q PCR方法验证该mi RNA在四组细胞中的表达是否与芯片检测结果一致;(4)采用双荧光素酶实验检测筛选的mi RNA与PLK1是否存在直接调控作用。结果:(1)RT-q PCR检测四组细胞PLK1 m RNA表达,SW480与SW480 CSCs相对水平分别为(1.00±0.13)及(3.22±0.10),SW480 CSCs-NC与SW480 CSCs-RNAi相对水平分别为(1.99±0.17)及(0.92±0.09),差异均具有统计学意义(P<0.01);Western blot检测PLK1蛋白表达,SW480与SW480 CSCs蛋白表达分别为(0.68±0.05)与(1.16±0.08),SW480 CSCs-NC与SW480 CSCs-RNAi蛋白表达分别为(1.50±0.11)与(0.27±0.06),差异均具有统计学意义(P<0.01),提示PLK1与OCT4B1呈相同趋势变化;(2)mi RNA芯片检测发现mi R-8064与OCT4B1及PLK1变化趋势相反,通过生物信息学软件Target Scan human分析发现它与PLK1存在结合位点;(3)进一步通过RT-q PCR证实mi R-8064在四组细胞中表达,SW480与SW480 CSCs相对水平分别为(1.00±0.12)及(0.40±0.06),SW480 CSCs-NC与SW480 CSCs-RNAi相对水平分别为(0.12±0.03)及(0.93±0.02),均具有统计学意义(P<0.05),发现在四组细胞中mi R-8064表达与芯片检测结果一致;(4)通过双荧光素酶实验证实PLK1是mi R-8064直接靶基因。结论:OCT4B1诱导EMT使肿瘤细胞获得干细胞特性,其机制部分与OCT4B1抑制mi RNA-8064表达进而促进靶基因PLK1表达有关。