近年来肺癌已成为死亡率最高的恶性肿瘤，其导致的死亡人数比乳腺癌，前列腺癌和结直肠癌加起来还要多。大部分被诊断的肺癌病例是非小细胞肺癌，这些患者的五年生存率低，其不良预后主要与肿瘤细胞的增殖和侵袭转移有关。因此，寻找促进与肺癌增殖、侵袭和转移密切相关的因子成为我们研究的重中之重。　　 ataxia-telangiectasia group D complementing gene(ATDC)，最早是作为共济失调性毛细血管扩张症的致病基因而被发现的，它具有抑制放疗敏感性的功能。ATDC，也称作TRIM29，是tripartite motif(TRIM)家族的一员。有研究指出该家族蛋白在细胞生长，发育以及一些人类疾病如HIV感染和白血病中都起到一定作用。已有文献报道ATDC在胰腺癌，胃癌，膀胱癌，结直肠癌，卵巢癌，子宫内膜癌以及多发性骨髓瘤中过表达，而在黑色素瘤，乳腺癌，前列腺癌以及头颈部肿瘤中却表达下调。有报道指出ATDC在体外可以促进胰腺癌细胞增殖，在体内能够加速肿瘤的生长和侵袭。在胰腺癌细胞中ATDC能够通过DVL-2来稳定beta-catenin的蛋白水平，从而beta-catenin入核与TCF/LEF结合，激活Wnt信号通路下游经典靶基因的转录。还有研究发现，当在鼠胚成纤维细胞中过表达ATDC后，ATDC能通过细胞骨架细丝与p53结合，改变p53的核定位，抑制p53在核内发挥功能，从而抑制p53下游基因p21的表达。但ATDC在肺癌进展中发挥的作用未见报道，ATDC究竟能通过什么样的机制影响肺癌的生物学行为也不清楚。　　 在本次研究中，我们通过免疫组化检测了ATDC在非小细胞肺癌中的表达情况，并对ATDC的表达与临床病理因素的关系进行了分析，同时应用双向调控ATDC表达后，进一步验证其对肺癌细胞增殖和侵袭的生物学作用及可能的机制。　　 材料与方法　　 1、组织来源　　 选取109例原发性NSCLC蜡块，标本来自2001年到2004年在中国医科大学附属第一医院实行手术的病人，患者术前均未接受放化疗。根据WHO2003标准进行诊断，按国际抗癌联盟(UICC，2007)进行P-TNM分期。　　 2、免疫组织化学染色　　 将石蜡组织块切成4μm厚切片，脱蜡，脱水，采用S-P法进行免疫组织化学染色。检测肺癌组织及正常肺组织中ATDC，p65，cyclinD1和Ki67表达。结果判定:ATDC免疫组化阳性信号定位于细胞浆或核/浆共表达。我们将1-25％的细胞浆着色记为1分。26-50％记为2分，51-75％记为3分，76-100％记为4分。同时根据染色强度:无染色记为0分，黄色颗粒记为1分，棕褐色颗粒记为2分。着色细胞数得分乘以着色强度得分为ATDC得分。我们将得分0-4分记做ATDC阴性，得分5-8分记做ATDC阳性。p65组化阳性信号定位于细胞核。染色范围:0-25％的细胞着色记为0分，26-50％记为1分，51-75％记为2分，76-100％记为3分。染色强度:无染色记为0分，黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分。二者相加0-2分记做阴性，3-6分记做阳性。Cyclin D1组化阳性信号定位于胞浆和（或）核，Ki67组化阳性信号定位于细胞核，随机选择5个高倍镜(×400)视野进行计数，每个视野计数100个细胞，Cyclin D1以核浆着色的阳性细胞数＞25％视为阳性标本，Ki67以核着色的阳性细胞数＞20％视为阳性标本。　　 3、细胞培养，质粒转染与siRNA干扰　　 向ATDC低表达的NHBE转染ATDC过表达质粒，向ATDC高表达的人肺腺癌细胞系A549和H1299(p53缺失)中转染ATDC特异性siRNA，并验证其效率。　　 4、MTT，集落形成，PI单染和Transwell实验　　 用MTT和集落形成检测ATDC对肺癌细胞增殖的影响;用PI单染检测ATDC对肺癌细胞周期的影响;用Transwell实验检测ATDC对肺癌细胞侵袭的影响。　　 5、免疫印迹和实时定量PCR　　 免疫印迹和定量PCR检测在ATDC在正常支气管上皮细胞和肺癌细胞中的基础表达量，转染和干扰效率以及ATDC调控肺癌增殖和侵袭中起关键作用的因子。　　 6、荧光素酶报告基因　　 荧光素酶报告基因检测ATDC调控肺癌增殖和侵袭中起关键作用的信号通路。　　 结果：　　 1、ATDC在正常支气管上皮和正常肺泡上皮细胞中呈阴性表达，而在NSCLC组织中的阳性率为56.88％(62/109)，其阳性信号主要定位于细胞浆。ATDC的过表达与肿瘤大小(T1 vs T2-T4∶42.11％ vs64.79％，p=0.0227)，分化程度(高分化vs中低分化:31.43％ vs68.92％，p=0.0002)，组织学分型(鳞癌vs腺癌:97.83％ vs26.98％，p＜0.0001)有显著相关性。提示我们ATDC作为促癌因子发挥作用。　　 2、在人类正常支气管上皮细胞HBE中过表达ATDC可明显上调其Cyclin D1，CDK4/6和p-Rb的蛋白表达，促进细胞的增殖和克隆形成能力;而干扰内源性ATDC高表达的A549和H1299肺癌细胞中其基因表达后，可明显下调上述周期相关蛋白的水平，抑制肺癌细胞的增殖和克隆形成能力。转染ATDC可明显上调NF-KB信号通路活性，而干扰ATDC可明显下调NF-κ B信号通路活性;转染ATDC再加入NF-κ B抑制剂BAY11-7082后细胞周期相关蛋白表达明显下调。转染或干扰ATDC后，TOP/FLASH和p53的报告基因的活性均无明显的改变。　　 3、siRNA干扰ATDC的表达后，肺癌细胞的侵袭能力明显减弱，并且MMP-9、c-Jun和c-Fos的蛋白和mRNA表达均下调，同时AP-1报告基因的活性以及p-ERK和p-JNK的水平也同时下调。而在HBE细胞中转染ATDC质粒后，出现了与上述相反的结果，并且发现转染ATDC后加入MMP-9单抗可抑制细胞的侵袭能力，加入ERK抑制剂U0126或JNK抑制剂SP600125可阻断ATDC引起的MMP-9表达上调，AP-1的活化及其促进细胞侵袭能力的作用。　　 结论：　　 1、ATDC在非小细胞肺癌中的过表达与肿瘤大小，分化程度和组织学分型相关。　　 2、ATDC能活化NF-κB信号通路来上调cyclin D1表达，促进肺癌细胞增殖。　　 3、ATDC能够活化ERK/JNK信号通路来上调MMP-9表达，促进肺癌细胞侵袭。