不同浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性影响

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:anitalok
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目的研究大鼠髓核间充质干细胞(NPMSC)体外培养的最佳血清浓度并探讨椎间盘退变的机制。方法用胶原酶、胰酶序贯消化法从SD大鼠腰部和尾部的椎间盘组织中提取NPMSC,并进行体外培养,将其传代。(1)利用流式细胞仪对第3代传代的NPMSC细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定;(2)利用普通PCR鉴定体外培养的NPMSC细胞基因Sox2、Nanog的表达;(3)在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSC,2~4周以后,用染色剂对其进行染色,观察其成脂、成骨、成软骨能力。(4)在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同浓度(0%、5%、10%、20%、30%)的DMEM-F12血清培养液培养第3代传代的NPMSC,72小时以后,利用CCK-8法检测细胞的增殖,并采用RT-PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达,借助流式细胞仪对细胞进行细胞凋亡的检测。结果(1)大鼠NPMSC的成骨、成软骨能力强,成脂能力较差,且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105,低度表达CD24、CD34,细胞基因Sox2、Nanog高度表达。(2)随着培养液血清浓度增加,OD值增大,NPMSC的凋亡率降低,细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。结论(1)大鼠NPMSC具有间充质干细胞特性;(2)细胞外营养影响大鼠NPMSC的增殖、分泌、凋亡。
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