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该研究旨在建立一种检测不同动物HEV抗体的ELISA方法,调查不同动物对HEV的易感性,探讨HEV抗体对不同重组抗原的反应性.主要研究内容和结果如下:一、动物HEV ORF2基因的克隆和表达用逆转录巢式PCR(RT-PCR)扩增HEV新西兰猪病毒株(Nz-s)ORF2的部分基因片段并克隆到pGEX-4T-2载体上,用双酶切和测序的方法进行鉴定;然后用重组质粒转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达p166Nz-s;亲和层析纯化表达产物并用PAGE电泳进行鉴定.双酶切鉴定和测序的结果说明目的基因正确连接到载体上,电泳结果证实p166Nz-s成功表达,而且所表达的重组蛋白纯度高.二、用多基因型的HEV重组蛋白建立双抗原夹心法ELISA(DS-ELISA)用p166Mix和HRP标记的p166Mix建立DS-ELISA.用DS-ELISA检测3只实验感染HEV的灵长类动物系列血清.结果显示3只实验动物感染HEV之前和感染后短时间内HEV抗体阴性,2~3月后阳转.说明新建立的DS-ELISA方法可以用于感染不同基因型HEV的不同动物血清HEV抗体的检测.三、与人类生活关系密切的7种动物血清HEV抗体和HEV RNA的检测用血清学和PCR方法研究与人类生活关系密切的7种动物对HEV的易感性.结果发现在猪、家犬和宠物狗血清标本中存在HEV抗体,警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体;犬血清标本用RT-nPCR未扩增出HEV RNA.表明用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测;猪和犬对HEV易感,在HEV传播中可能起重要作用.四、人和动物血清抗HEV抗体血清学关系的研究将代表四种基因型的HEV重组蛋白分别包被酶标板对实验感染HEV的灵长类动物血清以及部分HEV抗体阳性的人和动物血清标本进行检测,分析人和动物血清HEV抗体对不同HEV重组蛋白反应性的差异.结果显示,用与所感染HEV病毒株相同基因型的重组蛋白检测效果最好;p166Pak对部分感染第Ⅳ基因型HEV病毒株的实验动物血清缺乏反应性;大部分病人和动物血清标本用p166Nz-s和p166Chi检测效果较好,部分标本对p166Pak和p166Mex反应性较差.提示人和动物HEV抗原性存在交叉但与基因型有关,人HEV第1基因型重组蛋白会对部分感染HEV第Ⅳ基因型病毒株的个体所产生的抗体缺乏反应性.我们的研究结果表明,用人和动物的多基因型和亚型的HEV重组蛋白建立的检测HEV抗体的双抗原夹心法ELISA适用于感染不同基因型HEV病毒株的不同动物血清HEV抗体的检测;猪和犬对HEV易感,它们在HEV传播过程中可能起了重要作用;HEV抗体对不同基因型HEV重组蛋白的反应性有差别.用与所感染的HEV病毒株属于同一个基因型的重组蛋白作为检测抗原最佳;第Ⅰ基因型重组蛋白对部分第Ⅳ基因型HEV病毒株感染所产生的抗体缺乏反应性,单用第Ⅰ基因型重组蛋白作为检测抗原容易造成漏诊;多基因型HEV重组蛋白混合物是HEV ELISA诊断检测抗原的最佳候选.