微生态制剂不仅可以预防疾病、促进动物机体生长发育,而且具有绿色、安全、无残留等优点,被广泛应用于畜牧养殖业。研究表明,由于益生菌黏附作用具有种属特异性,所以利用牛源益生菌来研制牛用微生态制剂具有较好的应用价值和应用前景。目前有关牛专用微生态制剂的报道较为少见。因此,本研究开展牛源微生态制剂的研制,并通过临床应用效果进行客观评价。本试验从大别黄牛的六段肠道内分离具有益生潜力的菌株,并利用形态学检测、革兰氏染色、镜检等方法进行有效筛选;将筛选后的菌株进行16 S r DNA基因测序,并将测序结果与Gen Bank数据库进行同源性比对;分别对菌株进行耐酸试验与耐胆盐试验,选出两株在酸与胆盐环境下存活率均较高的菌株;对菌株进行扩大培养,制备复合微生态制剂用于后续临床饲喂试验。选择12只体型相近的健康大别山犊牛,采用随机数表法将其随机分为三组,分别为对照组(CG组)、芽孢杆菌组(BG组)、试验组(EG组),CG组饲喂基础日粮,BG组饲喂基础日粮加枯草芽孢杆菌,EG组饲喂基础日粮加前期制备的复合微生态制剂。试验为期30 d,分别于试验的0 d、15 d、30 d选择所有犊牛经颈静脉采血,并分离血清,检测其生化指标、免疫指标、细胞因子、氧化与抗氧化指标。并在试验的30 d采集牛粪便进行高通量测序,检测其菌群丰度与结构变化。试验结果如下:1.从大别山黄牛体内分离到菌株共23株,经形态学检测与染色镜检排除12株,对剩余的11株菌进行16 S r DNA基因测序,经鉴定,11株菌株包含6株芽孢杆菌与5株乳酸菌。2.芽孢杆菌耐酸结果显示,B2、B3、B5、B6四株芽孢杆菌能够耐受p H为2的PBS溶液,存活率分别为48.59%、73.89%、84.91%、54.20%,后将四株芽孢杆菌进行耐胆盐试验,结果显示B2、B3、B5能够耐受0.6%的牛胆盐溶液,存活率分别为23.44%、27.44%、68.16%。乳酸菌耐酸结果显示,L1、L3、L4、L5四株乳酸菌能够耐受p H为2的PBS溶液,存活率分别为40.55%、70.23%、42.69%、58.99%,后将四株乳酸菌进行耐胆盐试验,结果显示L3、L4能够耐受0.6%的牛胆盐溶液,存活率分别为50.57%、39.10%。考虑到选取在酸与胆盐中存活率都较高的菌株作为微生态制剂的菌株会取得较好的效果,因此选择B5枯草芽孢杆菌和L3乳酸乳球菌。3.血清生化指标检测结果显示,与CG组相比,BG组、EG组的ALT、AST、TP、ALB、GLB、UREA均无显著差异,ALP含量极显著提高(P<0.01),TP、ALB均呈现上升趋势,UREA总体呈现下降趋势,BG组与EG组相比生化指标均无显著差异。4.免疫指标检测结果显示,与CG组相比,BG组、EG组的Ig G含量极显著提高(P<0.01),并且30 d时,EG组Ig G含量显著高于BG组(P<0.05);EG组Ig M含量极显著高于CG组与BG组(P<0.01);BG组与EG组的Ig A含量与CG组相比差异不显著。5.与CG组相比,BG组与EG组的IL-1、TNF-α含量差异不显著;EG组的IL-2含量显著高于CG组(P<0.05),但与BG组差异不显著,但随着饲喂时间延长,BG组的IL-2含量具有上升趋势;BG组和EG组的IL-6含量显著高于CG组(P<0.05);BG组与EG组的IFN-γ含量显著高于CG组(P<0.05)。6.与CG组相比,BG组与EG组在T-AOC、GSH-Px、CAT三个指标均显著升高(P<0.05),BG组与EG组差异均不显著;BG组和EG组的MDA含量显著低于CG组;EG组的SOD含量极显著高于CG组(P<0.01),BG组的SOD含量显著高于CG组(P<0.05),BG组与EG组差异不显著。7.肠道高通量测序结果显示,各组间肠道菌群丰度没有明显变化,但EG组和BG组中的拟杆菌门微生物所占比例增加,且EG组比BG组增加更为明显。同时,EG组和BG组中变形菌门微生物所占比例有所降低,且EG组比BG组降低的更为明显。综上所述,在断奶大别山黄牛日粮中加入牛源微生态制剂能够促进犊牛的生长发育,增强机体的免疫功能和抗氧化水平,提高机体的抗病能力,同时,复合微生态制剂能够改善大别山黄牛的肠道菌群结构,增高有益菌群数量,降低有害菌群数量,并且复合微生态制剂对机体的作用效果优于单一微生态制剂。