解淀粉芽孢杆菌YN-1抑制植物病原真菌活性物质研究

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从郑州郊区果园土壤中筛选出一株芽孢杆菌菌株YN-1,该菌株具有广谱拮抗植物病原真菌作用,其发酵液在121℃下高压灭菌20min,然后在4℃下储存半年,仍然保持对多种植物病原真菌良好的抑菌活性。通过形态学观察、生理生化特征鉴定、以及16SrDNA和ITS序列同源性分析表明该菌属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。通过综合分析推测发酵液中可能含有生化特性稳定的脂肽抗生素。本研究包括3个方面的研究内容:1.利用已知的脂肽抗生素合成相关基因序列设计4对特异引物对解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株基因组进行基因检测。2.按照脂肽抗生素分离纯化方法定向对菌株YN-1发酵液活性物质进行提取,获得粗提物质。研究粗提取物质的生化特性,并对粗提物质是否为解淀粉芽孢杆菌YN-1发酵液的主要成分进行验证。3.利用HPLC对活性粗提物质进行检测,探索活性粗提物质分离实验参数,然后以获得的HPLC分离参数为依据,利用HPLC-ESI-MS和MALDI-TOF-MS检测对活性粗提物进行定性定量分析。结果表明:1.解淀粉芽孢杆菌YN-1基因组中含有sfp、fenB、ituA或bamA基因;2.菌株YN-1发酵液粗提物特性与脂肽抗生素一致:具有广谱抑制植物病原真菌活性,并且对温度、对蛋白酶K不敏感。另外通过实验证实粗提物质为菌株YN-1发酵液广谱抗植物病原真菌物质的主要组分。3.通过梯度洗脱得到峰型较好、分辨率高的HPLC色谱图,获得活性粗提物质HPLC分离参数。LC-ESI-MS和MALDI-TOF-MS检测分析表明活性粗提物中含有C14-IturinA、C15-ImrinA、C16-IturinA、C14-FengycinA、C15-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C16-FengycinB、C17-FengycinB九种脂肽抗生素,其中C16-IturinA、C14-FengycinA、C16-FengycinA、C17-FengycinA、C17-FengycinB五种脂肽抗生素为活性粗提物中主要成分(>5%)。这些结果为利用菌株YN-1及揭示其防治植物真菌病害奠定了基础。
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