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诃子为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz.,T.Chebula）的干燥果实,在我国药用历史悠久,收存于多种古方典籍中,用于多种症候的改善。现代药理学研究揭示诃子在抗肿瘤、抗炎镇痛等方面具有显著活性。课题组前期对40种常见藏药的抗氧化活性进行了筛选评价,结果发现诃子表现出极强的抗氧化活性。由于阿尔兹海默症的发生与发展,同机体氧化应激稳态息息相关,因此课题组前期利用秀丽隐杆线虫模型开展了大量的诃子抗AD活性研究,结果显示诃子及含诃子的复方八味沉香丸可通过调控daf-16核转位,调控下游DAF-16和Hsp16.2表达,改善Aβ1-42诱导的毒性,降低线虫中Aβ1-42寡聚物水平,发挥其抗AD活性。AD转基因秀丽隐杆线虫模型通过将人源Aβ1-42基因整合在线虫组织中,产生Aβ病理。由于秀丽隐杆线虫中淀粉样前体蛋白APP的同源物APL-1不含Aβ序列,并且不具有Aβ剪切中关键酶β-剪切酶的活性,因此秀丽隐杆线虫模型更多的应用于筛选改善Aβ诱导毒性的药物中,难以深入研究药物对Aβ产生以及降解中的作用。因此,本课题在前期研究工作的基础上,开展了诃子对外源性Aβ诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的改善,同时,深入地研究了APPswe转基因细胞中,诃子对Aβ产生过程中α/β/γ-剪切酶活性、以及对Aβ降解作用的影响,较为全面地阐明了诃子抗AD的活性及机制;同时也研究了诃子发挥抗AD活性的物质基础。工作的主要研究内容和研究结果如下:研究发现诃子对外源AβO诱导的人源神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤具有改善作用。本文首先建立了Aβ1-42的寡聚物诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。AβO作用24 h后,细胞质内Ca2+异常升高（与空白组相比升高了62.8%）,细胞ATP合成受阻（与空白组相比下降33.2%）,细胞ROS水平上调,线粒体膜电位去极化,同时发生Cyt C/Caspase-3依赖的细胞凋亡。在40μg/m L诃子水提液（TWE）给药后,Ca2+水平下调30.4%,ATP水平上调33.0%,ROS水平异常升高和MMP去极化现象被逆转,且Cyt C/Caspase-3依赖的细胞凋亡水平降低8.23%,有效改善了由AβO诱导的Ca2+异常代谢以及线粒体代谢紊乱。APPswe转基因细胞中的研究指出,10、40、80μg/m L诃子水提液作用后,细胞外Aβ1-40和Aβ1-42呈现出诃子水提液浓度和时间依赖的下降;其中,80μg/m L TWE作用转基因细胞24 h和48 h后,胞外Aβ1-40的水平下降39.6%和42.8%,Aβ1-42分别降低36.0%和50.7%;α-剪切酶（ADAM10）表达升高1.37倍,β-剪切酶（BACE1）表达降低2.1倍,γ-剪切酶（PS1）表达下调1.24倍,s APPα水平上升4.93倍,s APPβ水平降低1.21倍,表明诃子水提液抑制APP蛋白的淀粉样代谢途径、促进非淀粉样代谢途径。此外,TWE可上调转基因细胞自噬活性,自噬抑制剂CQ阻断自噬后,细胞外Aβ1-42的水平上升1.27,ADAM10水平上升1.41倍,BACE1水平上升1.23倍,s APPα水平上升1.72倍,s APPβ水平上升1.17倍,表明TWE诱导的自噬抑制APP蛋白的淀粉样途径,抑制胞外Aβ1-42积累。通过对水提液进行萃取并考察各萃取相的活性,结合UPLC-MS/MS等分离,显示TWE中主要成分诃子酸（CN）可能是其发挥抗AD作用的重要物质基础。实验证实,在10μM CN处理APPswe转基因细胞后,细胞外Aβ1-40水平下降14.8%,细胞外Aβ1-42水平下降42.7%。该过程中,ADAM10表达升高1.23倍,BACE1表达降低2.3倍,PS1表达下调1.66倍,s APPα水平上升2.61倍,s APPβ水平降低4.35倍,同时,BACE1酶活性降低1.15倍,表明CN抑制BACE1活性,调控APP代谢途径向非淀粉样代谢途径转变而实现。同TWE一致,CN诱导转基因细胞自噬,CQ阻断自噬后,细胞外Aβ1-42的水平上升1.52倍,ADAM10、BACE1、s APPβ水平无显著变化,s APPα水平上升1.48倍,表明TWE诱导的自噬加速APP蛋白的非淀粉样途径,下调胞外Aβ1-42水平。此外,CN还能够改善外源性Aβ诱导的氧化损伤;结果指出,20μM CN处理SH-SY5Y细胞后,阻断AβO诱导的损伤,具体表现为细胞质Ca2+水平下调32.8%,细胞ATP水平上调27.0%,线粒体ROS异常升高和MMP去极化现象逆转,Cyt C/Caspase-3依赖的细胞凋亡水平降低6.5%,表明CN可以改善AβO诱导的SH-SY5Y细胞中Ca2+异常代谢,以及线粒体代谢紊乱。综上所述,本论文深入探讨了诃子的抗AD活性,并对其主要成分诃子酸的抗AD活性进行了研究。结果表明诃子和诃子酸能够有效改善外源AβO诱导的SH-SY5Y细胞中Ca2+异常代谢和线粒体代谢紊乱,并通过调控SH-SY5Y/APPswe细胞中APP的剪切酶活性,增强其非淀粉样代谢途径,抑制Aβ生成;同时,诱导细胞自噬增强Aβ降解。上述结果可为抗AD药物开发和深入挖掘民族药的现代药用价值提供参考数据。