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极细链格孢菌（Alternaria tenuissima）是一种植物病原真菌,对农业生产危害巨大,然而其在生防、环保等方面也有应用,因此从分子水平研究该菌的功能基因的调控机制,对进一步开发利用该菌具有重要意义。在真核微生物的遗传学研究中LEU2和HIS3基因是重要的营养标记,通过遗传学手段,我们筛选获得了极细链格孢菌AtLEU2及AtHIS3基因,并且研究了AtLEU2及AtHIS3基因互补酿酒酵母的功能。以G418抗性基因作为选择标记,构建了用于敲除极细链格孢菌AtLEU2及AtHIS3基因的质粒,建立了极细链格孢菌的遗传转化系统,为进一步研究AtLEU2及AtHIS3基因的功能奠定了坚实的基础,主要研究结果如下:1、将极细链格孢菌cDNA表达文库转化到酵母LEU2缺失突变株,用SD-LEU培养基进行筛选,获得了3个正常生长的酵母转化子。对转化子质粒进行测序分析,发现这些基因编码的蛋白质序列均与酵母LEU2（ScLEU2）基因编码的363个氨基酸同源（命名为AtLEU2,其编码的蛋白质命名为Atleu2p）,该基因编码的蛋白与植物病原菌小麦颖枯病CAB72262;灰葡萄孢霉EDN21270;玉蜀黍赤XP386851,以及水稻稻瘟病病菌XP367617所编码的β-苹果酸脱氢酶同源,相似性分别达到94%、74%、1%和69%,与酿酒酵母、粗糙链孢霉EAA33847相似性为70%和63%。2、将极细链格孢菌cDNA表达文库转化到酵母HIS3缺失突变株,在SD-HIS培养基上筛选,获得了2个正常生长的转化子。所得基因的开放阅读框（ORF）含有717个碱基,编码238个氨基酸,与酵母HIS3（ScHIS3）基因同源（命名为AtHIS3,其编码的蛋白质命名为AtHis3p）,AtHis3p与植物病原真菌链格孢BAF69039,小麦颖枯病EAT83561,灰葡萄孢霉EDN23196,玉蜀黍赤霉XP386269,以及水稻稻瘟病病菌XP367617中编码的咪唑甘油磷酸脱水酶同源,相似性分别达到100%,90%,68%,65%和63%;与生防菌哈茨木霉P34041相似性达64%;与酿酒酵母,粗糙链孢霉XP961386编码的蛋白相似性达64%和66%。3、分别选择以AtLEU2及AtHIS3基因上下游同源序列500 bp左右作为同源臂,在上游同源序列3’端连接G418抗性基因（以保证缺失突变株的检测及鉴定）,构建了用于敲除极细链格孢菌AtLEU2及AtHIS3基因的质粒,为在极细链格孢菌中敲除AtLEU2及AtHIS3基因奠定了坚实的基础,为进一步研究链格孢菌AtLEU2及AtHIS3基因的功能及作用机理提供了重要的试验材料。4、基于极细链格孢菌在含有G418（100μg/mL）的PDA培养基上不能生长的药物敏感性实验结果,建立了用G418抗性基因作为选择标记的遗传转化系统,从而为研究极细链格孢菌功能基因的敲除、缺失突变株鉴定提供了可靠的筛选标记,并为后续研究打下必要的基础。