研究背景:　　心血管病是危害人类健康最常见的一种疾病，动脉粥样硬化形成是心血管病的主要病理基础。动脉粥样硬化具有发病率高、复发率高、病残率高、致死率高等特点。随着人口老龄化进程的加速，高血压、高血脂、糖尿病患者逐年增多，心血管病的发病率不仅在中老年中有所增加，而且年轻化的趋势日渐明显，给家庭和社会带来沉重负担。动脉粥样硬化斑块将导致血管管径狭窄和血栓形成，斑块破裂、脱落，栓塞冠状动脉将导致急性心肌供血不足而使心脏细胞代谢障碍。　　MicroRNA（miRNA）是一种非编码RNA，能导致靶基因的沉默，是真核基因表达的一种重要的调控方式。miRNA能作为临床疾病的生物学标记物及治疗靶点指导疾病的诊断和治疗，是目前研究的热点。miRNA在动脉粥样斑块形成过程中具有重要作用。miRNA 便于在体内给药来观察其治疗效果，研究发现在 LDL 受体敲除小鼠（Ldlr-/-）中，miR-33拮抗剂能够促进胆固醇逆行转运（Reverse Cholesterol Transport，RCT），减少斑块体积及脂质含量，增加斑块稳定性标记物的表达，降低炎症基因表达。一系列关键的miRNA 靶向作用于动脉粥样硬化形成相关的细胞：内皮细胞、单核细胞以及平滑肌细胞，这些miRNA有望成为抗动脉粥样硬化的防治靶点，基于miRNA的基因治疗方案将在心血管病的防治中成为未来的亮点。　　我们通过球囊损伤联合高脂饮食喂养，建立了成熟的大鼠颈动脉粥样硬化模型，通过芯片检测动脉粥样硬化斑块中 miRNA 变化，并通过实时荧光 PCR 验证，发现miR-210 含量在动脉粥样硬化斑块中明显升高。通过收集颈动脉内膜剥脱术患者的斑块组织，发现在人颈动脉粥样硬化斑块中其含量也显著增加，这些提示我们 miR-210对动脉粥样硬化斑块的形成可能是具有促进作用。　　研究目的:　　1.探讨miR-210在冠心病患者中的表达及其临床意义。　　2.研究miR-210对动脉粥样硬化斑块形成的具体作用。　　3.阐明 miR-210 通过调控 TGF-β 信号通路抑制 CEH表达，以促进动脉粥样硬化形成。　　研究方法:　　一．miR-210在冠心病患者中的表达情况及其临床意义　　1. 选择2014年12月～2015年12月在我院心内科和老年病科住院的60例冠心病患者和同期健康受试者60例，并分为冠心病组和对照组。分析比较两组人员在年龄、性别、BMI、高血压、吸烟史、饮酒史、高血脂、血浆BNP、心率和血红蛋白的差异。　　2. 采用RT-PCR检测两组人员血清中miR-210的表达量。　　3. 采用多因素Logistic回归分析冠心病患病的危险因素。　　二．miR-210对动脉粥样硬化斑块形成的作用　　1. 采用 RT-PCR 检测 miR-210 在颈动脉粥样硬化模型大鼠颈动脉组织中的表达量。　　2. 特异性miR-210 Antisense antagomir及agomir抑制和增加miR-210后，采用酶氧化法检测不同miR-210表达水平组中颈动脉粥样硬化模型大鼠血脂水平。　　3. 采用油红O染色分析不同miR-210表达水平组中动脉内膜中脂质的沉积。　　4. 采用RT-PCR和Western Blot检测不同miR-210表达水平组中大鼠颈动脉粥样硬化斑块组织中CEH的表达量。　　三．miR-210通过调控TGF-β信号通路抑制CEH表达促进动脉粥样硬化形成　　1. 采用RT-PCR和Western Blot检测不同miR-210表达水平组PBMC和RAW264.7源性泡沫细胞中CEH的表达量。　　2. 采用液体闪烁计数仪检测不同miR-210表达水平组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中胆固醇流出率。　　3. 采用高效液相色谱仪检测不同miR-210表达水平组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中胆固醇的含量。　　4. 采用RT-PCR和Western Blot检测不同miR-210表达水平组RAW264.7 源性泡沫细胞中TGF-β和Smad2的表达量。　　5. 采用 RT-PCR 和 Western Blot 检测过表达 TGF-β 后不同 miR-210 表达水平组RAW264.7 源性泡沫细胞中Smad2和CEH的表达量。　　研究结果:　　1. miR-210在冠心病患者中的表达显著升高并是冠心病患病危险因素　　在冠心病组中miR-210的表达量为1.304±0.049，明显高于对照组中miR-210的表达量 1.035±0.047，两组比较差异具有统计学意义（t=3.979，P=0.0001）。多因素Logistic 回归分析显示，冠心病患病的独立危险因素有 BMI、高血压、吸烟史、饮酒史、高血脂和血清miR-210表达量（P<0.05）。　　2. miR-210能够促进动脉粥样硬化斑块形成　　在颈动脉粥样硬化模型大鼠颈动脉组织中，miR-210的表达量明显高于正常大鼠颈动脉组织中miR-210的表达量（P<0.05）；同时，动脉粥样硬化斑块组织中miR-210的表达量明显高于斑块旁组织中miR-210的表达量（P<0.05）。在采用特异性miR-210 Antisense antagomir及agomir抑制和增加miR-210后，在agomir-210组中动脉粥样硬化斑块组织中miR-210表达量明显升高（P<0.05），在antagomir-210组中动脉粥样硬化斑块组织中miR-210表达量明显降低（P<0.05）。agomir-210组大鼠血清中总胆固醇和低密度脂蛋白的含量明显升高，高密度脂蛋白含量明显降低，antagomir-210组大鼠血清中总胆固醇和低密度脂蛋白的含量明显降低，高密度脂蛋白含量明显升高。同时，agomir-210组大鼠动脉内膜中脂质沉积面积明显升高，antagomir-210组动脉内膜中脂质沉积面积明显降低。agomir-210 组动脉粥样硬化斑块组织中 CEH mRNA 和蛋白表达量明显减少，而antagomir-210组动脉粥样硬化斑块组织中CEH mRNA和蛋白表达量明显增加。　　3. miR-210通过调控TGF-β信号通路抑制CEH表达促进动脉粥样硬化形成　　agomir-210组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中，CEH mRNA和蛋白表达量均明显降低；antagomir-210组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中，CEH mRNA和蛋白表达量均明显升高。agomir-210组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中，胆固醇流出率显著减少，总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯均明显升高；antagomir-210 组PBMC和RAW264.7 源性泡沫细胞中，胆固醇流出率显著增加，总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯均明显降低。在低表达miR-210后，RAW264.7 源性泡沫细胞中TGF-β和Smad2 mRNA和蛋白的相对表达量明显升高。在过表达TGF-β后，Smad2、 CEH mRNA和蛋白表达量明显高于过表达miR-210组和正常表达miR-210组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；在过表达miR-210和正常表达TGF-β组，其Smad2、CEH mRNA和蛋白表达量最低，与其它各组相比差异均具有统计学意义（P<0.05 ）；在过表达miR-210和TGF-β组，Smad2、CEH mRNA和蛋白表达量与正常表达miR-210和TGF-β组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。　　研究结论:　　miR-210 在冠心病患者中高表达，并且是冠心病患病危险因素，miR-210 通过调控TGF-β信号通路抑制CEH表达，进而促进动脉粥样硬化形成。