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Shp2是含有两个SH2功能域的蛋白酪氨酸磷酸酶,在多种生长因子,激素及细胞因子等应答中都发挥了重要的生物学作用。以往的研究认为,Shp2通过与血小板表面PECAM-1受体胞内段磷酸化的ITIM结合,参与抑制GPVI信号通路,然而其具体的作用机制一直以来仍不明确。本研究进一步探索了Shp2对血小板功能的影响及可能的作用机制。结果概括为以下四点：(1)Shp2的抑制剂PHPS1显著抑制低浓度胶原和ADP引起的血小板聚集及释放。在相当于人体动脉流速的剪切应力(1000s-1)作用下,抑制Shp2可明显抑制血小板在胶原表面的黏附。PHPS1可抑制血小板在固定的纤维蛋白原上的铺展,却不影响凝血酶引起的血块收缩,说明Shp2参与了血小板早期的由外向内的信号通路(outside-in signaling),而不参与晚期的由外向内信号通路。(2)免疫共沉淀显示,低浓度胶原引起的血小板激活过程中Shp2与Syk结合形成蛋白复合物,PHPS1能够抑制二者结合,且该过程不依赖整合素αⅡbβ3。高浓度胶原刺激下,Shp2-Syk复合物不能被PHPS1所解离。(3)免疫印迹结果显示,PHPS1能够抑制低浓度胶原或ADP引起的血小板Akt和Erk的磷酸化水平,而不影响高浓度胶原介导的Akt/Erk磷酸化水平。(4)低浓度胶原或ADP刺激下,Syk抑制剂BAY61-3606能够抑制血小板聚集,及下游Akt/Erk磷酸化水平。本研究验证了血小板在低浓度胶原刺激下Shp2与Syk结合,二者共同调控下游Akt/Erk磷酸化水平,并引起血小板活化。PHPS1抑制二者结合,进而影响下游Akt/Erk磷酸化水平,抑制血小板活化。在ADP信号通路中,Shp2主要参与ADP的P2Y12受体介导的信号,调控下游Akt/Erk磷酸化水平。P2X1是血小板表面表达的唯一ATP受体。虽有研究认为P2X1通过活化Erk促进低浓度胶原引起的血小板活化,但P2X1的其他功能仍不明确。我们的研究发现ATP通过P2X1受体形成血小板激活的正反馈,ATP激活p38从而增强低浓度血栓烷A2类似物(U46619)引起的血小板聚集和释放。P2X1的抑制剂NF449或脱敏P2X1受体均能抑制低浓度U46619引起的血小板聚集及P-选择素表达。P2X1的刺激剂αβ-Me-ATP能够引起p38的磷酸化,且呈现剂量时间依赖性。P38的抑制剂SB203580而不是Mek的抑制剂U0126能够引起与NF449类似的抑制效果,但同时使用NF449和SB203580则没有叠加效果,提示ATP可能通过引起p38的活化进而促进U46619引起的血小板激活。我们将P2X1受体脱敏或抑制后发现,U46619引起的p38磷酸化在各个时间点均明显下降,Erk磷酸化并不受影响。而U46619激活的血小板中,p38抑制剂SB203580并不影响Erk磷酸化,Mek抑制剂U0126也不影响p38磷酸,进一步验证了Erk并不参与U46619通路中的P2X1信号。P2X1通过p38形成的正反馈只是在低浓度U46619引起的血小板活化中发挥作用,在高浓度刺激情况下P2X1的这种功能则被掩盖。