论文部分内容阅读
目的:探讨牡蛎肽对D-半乳糖致衰老雄性大鼠性行为及生殖功能的影响。方法:(1)建立衰老模型及分组:选取SPF级SD大鼠100只,体重320±20g,雌雄各半。将雄性大鼠随机分为5组,正常组(N组)、模型对照组(C组)、牡蛎肽高剂量组(H组)、牡蛎肽中剂量组(M组)、牡蛎肽低剂量组(L组),每组10只,各组配10只雌鼠。适应环境后,正常组给予颈背皮下注射0.025ml/g·d-1剂量生理盐水,其余组大鼠采用等剂量用生理盐水配制的5%的D-半乳糖溶液连续颈背皮下注射8周。(2)性行为测试:模型建立完成后进行性行为测试,雄性大鼠正常组与模型对照组按10ml/kg·d-1剂量给予生理盐水进行灌胃,牡蛎肽高、中、低剂量组分别按500mg/kg·d-1、250mg/kg·d-1、125mg/kg·d-1剂量给予牡蛎肽进行灌胃,连续给药4周。性行为测试前雌性大鼠每只皮下注射苯甲酸雌二醇使其动情期相同。在第0、7、14、28天,给药30min后,将雄鼠与雌鼠一一配对放入单独的笼里,观察并记录性行为(雄鼠对雌鼠的捕捉潜伏期、捕捉次数、射精次数、射精潜伏期)。(3)生化指标测试:性行为测试结束后,雄性大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉解剖,于下腔静脉取血,离心后取上清液备用。采用ELISA试剂盒测定待测血清的睾酮和锌的浓度,同时测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性。此外,取一定量的睾丸组织,冰浴匀浆,然后离心取上清液,同样用ELISA试剂盒测定待测匀浆中的干细胞因子(SCF)浓度,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性。(4)组织形态观察:下腔静脉取血的同时,手术分离睾丸和附睾,备用。睾丸组织制备永久切片,HE染色观察及记录组织形态。另取一定量的睾丸组织,硫柳汞曲拉通溶液匀浆,光学显微镜下红细胞计数板观察精子,计算每克睾丸每日精子生成量。取附睾尾,于生理盐水中剪碎,37℃温育,制备精子悬液。光学显微镜下细胞计数板观察并计算精子数量,HE染色观察并计算精子存活率和精子畸形率。结果:(1)随着实验的进展,除正常组以外,其余大鼠逐渐出现衰老状态。(2)牡蛎肽能使D-半乳糖致衰老雄鼠缩短捕捉潜伏期,增加捕捉次数、射精次数和射精潜伏期。其中高剂量组各项指标与模型对照的具有显著差异(p<0.05),与正常组接近且无显著差异(p>0.05)。(3)牡蛎肽能升高D-半乳糖致衰老雄鼠血清锌和睾酮的含量;以及提升血清及睾丸组织的SOD、GSH-Px和CAT水平;同时升高睾丸组织的SCF水平。其中高剂量组各项指标与模型对照的具有显著差异(p<0.05),与正常组接近且无显著差异(p>0.05)。(4)牡蛎肽能改善D-半乳糖致衰老雄鼠睾丸萎缩的症状,修复生精小管上皮的结构损伤,促进生精细胞、支持细胞和间质细胞增殖并减少坏死出现;增加精子数量、精子存活率及精子每日生成量,降低精子畸形率。其中高剂量组各项指标与模型对照的具有显著差异(p<0.05)。结论:牡蛎肽对D-半乳糖致衰老雄性大鼠性行为及生殖功能具有改善作用,能在多层次改善生殖衰老状态。