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目的:
研究高致癌性HPV16E7抗原肽体外诱导HLA-A2.1阳性正常人外周血抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)免疫表型及其功能状态。
方法:
分离26例HLA-A2.1阳性正常人外周血单个核细胞,观察组分别加入HPV16E711-20多肽(HLA*0201限制性表位肽/YMLDLQPETT)、重组人IL-7、IL-2,对照组加入无关肽HBVcore18-27、rhIL-7、rhIL-2,体外培养7 d后用五聚体(pentamer)技术结合四色流式细胞术检测抗原特异性CTL免疫表型(CD8+CD45RA+CD27-效应性CTL、CD8+CD45RA-CD27-效应性记忆CTL、CD8+CD45RA-CD27+中枢性记忆CTL、CD8+CD45RA+CD27+初始性CTL)及其FasL、穿孔素、颗粒酶B表达。
结果:
病毒多肽体外刺激7 d后,外周血单个核细胞中抗原特异性CTL平均为0.73%,明显高于未刺激组(0.02%)及无关肽刺激组(0.01%)(P<0.001)。在抗原特异性CTL中,CD8+CD27+细胞占五聚体阳性和五聚体阴性细胞的百分率分别72.71%和56.78%,而CD8+CD45RA-细胞占五聚体阳性和五聚体阴性细胞的38.72%和54.01%。CD8+CD45RA-CD27-效应性记忆CTL、CD8+CD45RA+CD27+初始性CTL占五聚体阳性细胞百分率分别为17.22%、50.79%,而其在五聚体阴性细胞中百分率分别为32.75%、35.30%,差异具有统计学意义(P<0.001);CD8+CD45RA+CD27-效应性CTL、CD8+CD45RA-CD27+中枢性记忆CTL占五聚体阳性细胞百分率分别为10.07%、21.92%,而其在五聚体阴性细胞中百分率分别为10.47%、21.47%,差异无显著性(P>0.05)。穿孔素、颗粒酶B、Fas-L阳性表达率在五聚体阳性CD3+CD8+细胞(HPV16E711-20表位特异性CTL)中分别为47.01%、80.53%、26.48%,但其在五聚体阴性组分别为4.91%及50.59%、0.06%,差异具有统计学意义(P<0.001)。
结论:
HPV16E711-20多肽可诱导CD8+T细胞克隆扩增产生抗原特异性CD8+CTL。这些细胞的免疫表型存在高度异质性,可能是处于不同分化阶段的记忆及效应细胞群体组成。推测抗原特异性CD8+CTL可通过表达穿孔素、颗粒酶B、Fas-L来杀伤病毒感染靶细胞,在抗病毒免疫应答中发挥重要作用。