【摘 要】
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本论文设计并合成了T-2毒素半抗原和人工免疫原,对T-2毒素的直接竞争酶联免疫吸附分析方法进行了探讨,建立了T-2毒素的快速免疫检测分析方法,并在实际样品检测中进行了应用。
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本论文设计并合成了T-2毒素半抗原和人工免疫原,对T-2毒素的直接竞争酶联免疫吸附分析方法进行了探讨,建立了T-2毒素的快速免疫检测分析方法,并在实际样品检测中进行了应用。所建立的分析方法可以有效地进行现场快速定量检测,为快速免疫分析方法在食品安全领域的应用奠定了理论基础。在半抗原和人工免疫原的设计与合成中,利用T-2毒素与琥珀酸酐连接,进一步合成了半抗原活化酯,并与钥孔嘁血兰蛋白偶联,得到免疫原,与卵清蛋白偶联得到包被原,与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗原。通过免疫日本大耳白兔得到高效价及高特异性的抗体。选择了T-2毒素代谢物及其他5种生物毒素进行抗体交叉反应实验,结果表明此抗体与其他5种生物毒素均无交叉反应,与其代谢物HT-2毒素的交叉反应率为7%。通过对直接竞争酶联免疫吸附分析方法的条件进行优化,包括抗体包被量,工作液的离子强度,pH,T-2毒素标准品的稀释液等等,建立了一种简便、快捷、实用的T-2毒素免疫分析方法—直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC50为0.12±0.02μg L-1,IC15为0.01±0.003μg L-1。谷物及饲料样品采用50%甲醇(v/v)提取,2000r min-I震荡3min,静置,取上清,使用不同浓度的BSA/PBS溶液作为掩蔽剂进行稀释,然后进行直接竞争酶联免疫检测分析,即可有效的消除基质影响。进行添加回收试验,得到的回收率平均可达75%-102%。符合快速检测的回收率要求。通过液相色谱-质谱联用分析方法,对建立的T-2毒素直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证,两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值为0.9935。
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