绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, MO)是一种致病性微生物,感染绵羊后可导致绵羊出现喘气、咳嗽、渐进性消瘦和间质性肺炎等症状,严重的可导致绵羊死亡,给羊养殖业带来重大的危害,并会造成严重的经济损失。间质性肺炎的病理改变特征之一为肺间质纤维化,这是一种以细胞外基质沉积而造成的渐进性疾病。研究表明,TGF-β/Smad促纤维化通路在肺纤维化的形成过程中起着重要的作用。microRNAs是一类可通过靶向作用于其靶mRNA,并使其靶mRNA的翻译受到抑制的内源性非编码小RNA,它的长度约为21 bp～25 bp,在进化上高度保守。miR-145是一种22nt的高度保守的miRNA,目前有关miR-145在肺间质纤维化调节方面的研究甚少,尤其是miR-145对MO感染肺成纤维细胞(MRC-5)中TGF-β/Smad信号通路的调控研究尚未见报道,因此研究miR-145在MO感染MRC-5细胞TGF-β/Smad促纤维化通路中的作用有着重要的价值和意义。本实验中首先对绵羊基因组是否存在miR-145进行验证,然后利用生物信息学软件对miR-145在TGF-β/Smad信号通路中的靶基因进行预测,再通过荧光素酶报告系统实验对预测到的靶基因进行验证；成功构建MO感染MRC-5细胞模型,通过对miR-145的过表达和抑制,来探究miR-145在MO感染MRC-5细胞TGF-β/Smad促纤维化通路中作用,为探究miR-145在抗MO感染中的作用机制提供相关的实验依据。本实验的主要研究结果如下：(1)通过基因扩增和测序技术确定了绵羊基因组中含有miR-145,其序列与本课题组前期实验中做的miRNA表达谱中所测的序列一致。(2)利用生物信息学软件对miR-145在TGF-β/Smad促纤维化通路中的靶基因进行预测,预测到miR-145的靶基因是Smad3和Smad4,并通过双荧光素酶报告基因系统实验证实miR-145在TGF-β/Smad促纤维化通路中的靶基因是Smad3,而Smad4并不是miR-145的靶基因。(3)成功建立了MO感染MRC-5细胞模型,MO感染MRC-5细胞后,细胞中miR-145和纤维化相关因子的表达量显著升高。(4)对MO感染MRC-5细胞中miR-145进行过表达和抑制,通过mRNA和蛋白水平上的表达差异检测表明miR-145可靶向TGF-β/Smad促纤维化通路中的关键因子Smad3,进而影响通路下游因子的表达,实现对TGF-β/Smad促纤维化通路的负向调控作用。以上研究结果表明,在MO感染宿主细胞的过程中,可以刺激细胞中miR-145和促纤维化相关因子的表达,同时miR-145对TGF-β/Smad促纤维化通路具有负向调控作用。该实验结果对研究MO感染引起的纤维化进程调控提供了实验依据。