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目的:生物信息学分析和预测猪带绦虫热休克蛋白90α(Taenia solnium Heat shock protein90 alpha)基因及其编码蛋白的结构和特性,原核克隆表达猪带绦虫热休克蛋白90α基因(Ts HSP90α),对重组Ts HSP90α其免疫学功能进行初步研究。 方法:利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://ca.expasy.org/)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如 Vector NTI suite,从猪带绦虫全长cDNA质粒文库中识别Ts HSP90α基因及其编码区,分析、预测该基因编码蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。将猪带绦虫成虫HSP90α克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用 IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。 结果:该基因全长1079bp,编码区为176bp-1054bp,编码292个氨基酸,为全长基因;BLASTX发现该基因是热休克蛋白90α的同源基因; PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ts HSP90α重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌 BL21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;同时,重组蛋白能被猪带绦虫患者,亚洲带绦虫患者及牛带绦虫患者血清识别,表明重组蛋白具有免疫反应性。 结论:应用生物信息方法从猪带绦虫成虫 cDNA文库中筛选出了HSP90α基因,并对其所编码蛋白的结构与功能进行预测。猪带绦虫成虫热休克蛋白90α基因可在大肠埃希菌 BL21/DE3中获得具有免疫活性的高效表达。western-blotting显示重组蛋白具有免疫原性和免疫反应性。通过本研究为进一步阐明该蛋白在猪带绦虫生理代谢的作用机制奠定了基础。同时对该蛋白免疫学功能的初步研究也为今后开展带绦虫病的应用型研究提供一定线索。