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人类疾病往往是环境因素与遗传因素共同作用的结果,探讨基因与环境的相互作用机制与规律,对于防治环境因素造成的机体危害具有重要意义。1998年,周建伟等利用差异显示高通量筛选技术从培养的原代人的气管和支气管上皮细胞中分离克隆了一个在生物进化上高度保守的环境应答基因—JWA基因,其编码蛋白是一种新的微管相关蛋白,并受多种分化诱导剂如维甲酸(RA)、13顺-维甲酸(13-cRA)、三氧化二砷(AS2O3)和佛波酯(PMA)等调控,该基因可能参与多种白血病细胞的定向分化和凋亡,并与细胞应答环境中的热应激和氧化应激的信号转导通路有关。国外研究报道,与JWA基因同源的大鼠E18表达的蛋白GTRAP3-18可能是一种与Na+依赖的谷氨酸转运体EAAT3具有相关作用的新蛋白,并且能调控EAAT3介导的谷氨酸摄取。本研究旨在探讨JWA蛋白与谷氨酸转运的关系及其可能的机制,并进一步研究JWA参与调节环境污染物农药氰戊菊酯对细胞内氨基酸转运的影响。 为研究JWA基因对谷氨酸转运的影响,用pCMV2-flag-JWA载体转染的HEK293细胞,建立JWA高表达模型;用反义寡核苷酸技术抑制细胞内JWA表达,建立JWA低表达模型;用激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的含量,用免疫荧光和Western blot法检测细胞内JWA蛋白的分布和表达南京医科大学硕士学位论文水平。掺入口H]一D,L一谷氨酸为标志物观察了环月基因对细胞摄取谷氨酸的影响。根据J洲基因编码氛基酸的磷酸化位点的位置,分别构建了四个含不同长短了环月编码区多肤片段的pEGFP表达载体,转染HEK293细胞后,在活细胞观察佛波醋(PMA)对J洲表达和细胞内定位的影响。用不同浓度结果表明:了环月基因高表达的细胞摄取谷氨酸增加,用反义寡核普酸关闭J洲后,谷氨酸摄取下降。PMA可增加细胞谷氨酸转运,转染了环月对PMA引起的细胞谷氛酸摄取无显著影响。PMA还引起HEK293细胞内游离钙浓度一过性升高。PMA使转染pEGFPJ环匆的HEK293细胞内J环月表达升高,细胞内定位发生改变。用不同浓度的氰戊菊醋处理PC12细胞后发现可诱导了环月基因表达升高,并在一定浓度时促进细胞的谷氨酸摄取,提示该基因可能在细胞应答环境污染物对神经递质的影响中发挥作用。了砰月蛋白通过非PKC途径增强HEK293细胞谷氨酸转运功能,增强谷氨酸介导的神经兴奋传递,参与中枢神经系统病变,因而可能是一种参与调节中枢神经系统病变的新的信号分子。而PMA引起的细胞谷氨酸转运功能增强可能与细胞内钙稳态的改变有关。J认叭有可能参与了氰戊菊醋对谷氛酸转运的调控作用。