论文部分内容阅读
禽腺病毒(Fowl Adenovirus)是禽类病毒中最常见的其中一种,其中由血清4型禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染所引起的禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,HHS)主要以肝脏发黄肿胀,心包内积聚大量黄色透明状积液为主要特征,对我国的禽类养殖业造成严重的危害,经济损失严重。该病首发于1987年巴基斯坦的安卡拉地区,因此该病又叫禽安卡拉病。禽安卡拉病于2015年在我国呈大面积的爆发并开始流行,对3-6周龄的雏鸡容易造成感染,死淘率最高可达80%。开发安全有效的药物和疫苗来预防该病是非常迫切的,Fiber2蛋白是FAdV-4的主要结构蛋白之一,被认为是一种保护性免疫原,能够诱导产生中和抗体。DNA疫苗通常需要佐剂来提高递呈效率。本试验以Fiber2基因为研究对象,并加入鸡细胞因子IL-2作为基因佐剂,构建pc DNA3.1-Fiber2重组质粒,pc DNA3.1-IL2重组质粒,pc DN A3.1-Fiber2IL2重组质粒。将重组质粒分组对雏鸡进行免疫,探究它的免疫效果,为研制安全有效的安卡拉病疫苗提供初步的理论依据。结果如下:1.以本实验室新分离的新宾株肝组织DNA和鸡脾组织c DNA为模板,根据Gen Bank上FAdV-4 Fiber2基因、鸡IL-2基因序列设计引物,将Fiber2基因、IL-2基因以及Fiber2-IL2融合基因进行PCR扩增,扩增后将纯化的目的基因插入到克隆载体中,最后连接到pc DNA3.1真核表达载体里构建成重组质粒。对重组质粒进行PCR验证、HindⅢ和XbaⅠ双酶切鉴定、测序验证,显示pc DNA3.1-Fiber2重组质粒,pc DNA3.1-IL2重组质粒,pc DNA3.1-Fiber2IL2重组质粒构建成功。2.将上述已构建好的重组质粒对35只健康SPF雏鸡于14日龄进行分组免疫。通过ELISA方法检测免疫前、后SPF雏鸡血清中FAdV-4抗体水平、以及白细胞介素6(IL-6)和干扰素γ(IFN-γ)含量,进而对构建的重组质粒进行免疫效果的初步评价。试验结果显示,重组质粒分组免疫雏鸡后,均能够诱导机体产生FAdV-4抗体,刺激机体内IFN-γ、IL-6含量升高。细胞因子IL-2作为基因佐剂能提高pc DNA3.1-Fiber2重组质粒免疫效果。在FAdV-4抗体水平方面比较,pc DNA3.1-Fiber2重组质粒和pc DNA3.1-IL2重组质粒混合免疫与pc DNA3.1-Fiber2IL2重组融合质粒的免疫效果相比差异不显著。从提高机体内细胞因子含量以及免疫剂量与成本控制方面相比,pc DNA3.1-Fiber2IL2融合重组质粒要优于pc DNA3.1-Fibe-r2与pc DNA3.1-IL2混合免疫重组质粒。综上,以FAdV-4 Fiber2为目的基因构建的重组质粒可以诱导机体产生FAdV-4抗体,并刺激机体内IFN-γ、IL-6含量升高。细胞因子IL-2作为基因佐剂可以显著增强Fiber2基因重组质粒免疫效果。