第一部分D3形态学低评分胚胎体外囊胚形成的影响因素分析目的通过对影响D3形态学低评分胚胎囊胚形成的相关因素进行分析,为如何挑选低评分胚胎继续培养及提高囊胚形成率及质量提供数据参考。方法1.研究对象收集2012年04月至2014年8月在南方医院生殖中心行常规IVF/ICSI-ET治疗的1563个新鲜移植周期的临床资料,回顾性研究此1563个周期中继续行体外囊胚培养的共7198个D3形态学低评分胚胎。1.1纳入标准如下(满足下述所有标准)：(1)、采用黄体中期降调的长方案；(2)、新鲜周期有2或3个D3优质胚胎移植后还有剩余的低评分胚胎行囊胚培养；(3)、20岁≤年龄≤43岁；(4).16 kg/m2≤BMI≤30 kg/m2;1.2排除标准(符合下述任一标准)：(1)、新鲜周期行coasting方案；(2)、新鲜周期行两步移植或囊胚移植；(3)、子宫畸形、子宫器质性病变者以及既往有盆腔结核病史者；(4)、赠卵或使用供卵周期；(5)、临床资料不齐全者。2.相关性分析：行囊胚扩张期、ICM、TE质量分级分别与不孕年限、年龄、AFC、bFSH、BMI、Gn总剂量、HCG日E2、HCG日LH、成熟卵子数、D2胚胎碎片程度、D3胚胎碎片程度的相关性研究。3.分组标准：按患者年龄分为两组：<35岁、≥35岁；根据Keel J等研究报道将AFC分为三组：≤5个、6-14个、≥15；根据据Thum M Y等研究报道将bFSH水平高低分为两组：≤10mIU/L、>10mIU/L;根据注射HCG日E2水平分为三组：<1500 pg/ml、1500 pg/ml<to<3000 pg/ml、≥3000 pg/ml;根据COH过程中使用Gn总剂量大小分为三组：<1500IU.1500IU≤to<3000IU、≥3000IU;根据获得成熟获卵数分为三组：≤4个、5-15个、≥16个；根据受精方式分为：IVF、ICSI、 IVF+ICSI;根据D1原核数及形态分为5组：1PN、2PN、MI、MII、卵裂；根据Sjoblom P等研究将D2胚胎卵裂数分为四组：1-3个、4个、>4个、其他(包括1PN、2PN、MⅡ、未卵裂)；根据D2胚胎碎片程度分为三组：<10%、10%<to<20%、≥20%；根据D3胚胎卵裂球数分为四组：4-6个、7-9个、10-16个、com(融合)；根据D3胚胎碎片程度分为三组：<10%、10%<to<20%、≥20%。比较各组内组间的囊胚形成率及优质囊胚形成率。4.统计学方法采用SPSS21.0统计软件包对数据库进行统计学分析,双变量相关分析中,用Spearman相关系数；率的比较采用卡方检验。均以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、1563个周期中7198个D3形态学低评分胚胎行囊胚培养,形成4428个囊胚(61.5%)、形成2660个优质囊胚(37.0%)。年龄、Gn总剂量与囊胚扩张期呈显著负相关,成熟卵子数与ICM质量呈显著负相关,AFC与TE质量呈显著正相关,bFSH与TE质量呈显著负相关,D2胚胎碎片程度及D3胚胎碎片程度均与ICM、TE质量呈显著负相关。2、<35岁组的囊胚形成率及优质囊胚形成率均高于≥35岁组(P<0.01)；AFC为≥15个组的优质囊胚率高于6-14个组(P<0.05); bFSH<10mIU/L组优质囊胚形成率大于bFSH>10mIU/L组(P<0.05)。3、Gn总剂量≥3000IU组的囊胚形成率及优质囊胚形成率均显著低于<1500IU组和1500IU≤to<3000IU组(P<0.05); HCG日E2水平≥3000 pg/ml组囊胚形成率显著高于1500 pg/ml<to<3000 pg/ml (P<0.05);成熟卵子数分为≤4个、5-15个、≥16个三组间囊胚形成率及优质囊胚形成率差异均无统计学意义(P>0.05)。4、IVF组的优质囊胚率显著高于ICSI组(P<0.05)；原核形态为2PN组和MⅡ组的囊胚形成率及优质囊胚形成率最高且均显著高于1PN组和MⅠ组(P<0.05)；2PN组和MⅡ组间无显著性差异(P>0.05)；MⅠ组的囊胚形成率及优质囊胚形成率均最低且还显著性低于1PN组(P<0.05)。5、D2卵裂球数为4个组、>4个组、1-3个组、其他组的囊胚形成率及优质囊胚形成率依次显著减低(P<0.05)；D3胚胎卵裂球数为4-6个组的囊胚形成率及优质囊胚形成率最低且显著低于≥7个的三个组(P<0.05),D3卵裂球数为10-16个组的囊胚形成率及优质囊胚形成率均显著高于D3卵裂球数为7-9个组(P<0.05)。按D2胚胎碎片程度分为<10%组、10%<to<20%组、≥20%组,结果显示随着碎片程度的增加,囊胚形成率及优质囊胚形成率依次显著减低(P<0.05),在D3胚胎碎片程度分组,也有同样的结果。结论D3形态学低评分胚胎有一定的发育潜能,卵巢储备功能好、对Gn反应良好、IVF受精、D1原核为2PN或MⅡ、D2卵裂球数为4、D3卵裂球数≥7、D2和D3胚胎碎片程度均较小时的囊胚形成率及优质囊胚形成率较高。第二部分D3形态学低评分胚胎体外囊胚形成情况与D3优质胚胎移植后临床结局关系的研究目的探讨D3形态学低评分胚胎体外囊胚形成情况与IVF/ICSI-ET的临床结局和D3优质胚胎移植完时累积临床结局的关系。方法1.研究对象回顾性分析2012年04月至2014年8月在南方医院生殖中心行常规IVF/ICSI-ET治疗的1563个新鲜移植周期的临床资料。纳入及排除标准同第一部分。2.分组标准在1563个新鲜移植(IVF/ICSI-ET)周期中根据囊胚形成情况,将有囊胚形成定义为A组,无囊胚形成为B组；有优质囊胚形成为C组,无优质囊胚形成为D组。其中D3优质胚胎移植完、尚未移植囊胚的取卵周期有959个,在这959个周期中有囊胚形成定义为E组,无囊胚形成为F组；有优质囊胚形成为G组,无优质囊胚形成为H组；根据宋成等、胡煜等的研究将A组分为3个亚组：A1组：囊胚形成率<25%；A2组：25%≤胚形成率<50%；A3组：囊胚形成率≥50%；将C组分为3个亚组：C1组：优质囊胚形成率<25%；C2组：25%≤优质囊胚形成率<50%；C3组：优质囊胚形成率≥50%将E组分为3个亚组：El组：囊胚形成率<25%；E2组：25%≤囊胚形成率<50%；E3组：囊胚形成率≥50%；将G组分为3个亚组：G1组：优质囊胚形成率<25%；G2组：25%≤优质囊胚形成率<50%；G3组：优质囊胚形成率≥50%；主要分别比较A组与B组间、C组与D组间、A组中3个亚组间、C组中3个亚组间临床妊娠率、胚胎种植率、多胎妊娠率、流产率。比较E组与F组间、G组与H组间、E组中3个亚组间、G组中3个亚组间累积妊娠率、累积种植率。3.统计方法采用SPSS21.0统计软件包对数据库进行统计学分析,计量资料结果以均数士标准差表示,满足方差齐性条件时,采用独立样本t检验(Independent-samples t test)或单因素方差分析(one-way ANOVA),不满足方差齐性条件,则采用非参数的Kruskal-Wallis检验；率的比较采用x2或Fisher精确检验。均以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.在IVF/ICSI-ET周期中,有囊胚形成组(A组)的临床妊娠率、胚胎种植率均显著性高于无囊胚形成组(B组)(P<0.01),有优质囊胚形成组(C)的临床妊娠率、胚胎种植率及多胎妊娠率均显著高于无优质囊胚形成组(D组)(P<0.05)。2.在D3优质胚胎移植完、尚未移植囊胚的取卵周期中,有囊胚形成组(E组)的累积妊娠率、累积种植率均显著高于无囊胚形成组(F组)(P<0.05)有优质囊胚形成组(G组)的累积妊娠率、累积种植率均显著高于无优质囊胚形成组(H组)(P<0.01)。3. IVF/ICSI-ET周期中和D3优质胚胎移植完、尚未移植囊胚的取卵周期中均显示：有囊胚形成组的AFC显著高于无囊胚形成组,有优质囊胚形成组的AFC数显著高于、年龄及bFSH显著低于无优质囊胚形成组(P<0.01)；有囊胚形成组的Gn启动量和Gn总剂量均显著低于无囊胚形成组,有囊胚形成组的HCG日E2水平、获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数均显著高于无囊胚形成组(P<0.05),在有无优质囊胚形成组间的比较也有同样的结果。4.A3组的临床妊娠率及胚胎种植率显著性高于A2组(P<0.05)；E3组的临床妊娠率及胚胎种植率显著性高于E2组(P<0.05)；Cl组、C2组、C3组此三组间临床妊娠率、胚胎种植率、多胎妊娠率、流产率均无显著性差异(P>0.05),G1组、G2组、G3组此三组间的累积妊娠率和累积种植率均无显著性差异(P>0.05)。5.A1组、A2组、A3组三组间获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数差异无统计学差异,但A1组>A2组>A3组；C1组、C2组、C3组三组间HCG日E2水平、获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数均有显著性差异(P<0.001)且均为C1组>C2组>C3组；E3组HCG日E2水平显著性小于E2组(P<0.05),E3组的获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数均显著性小于El和E2组(P<0.05),虽E1组和E2组间获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数平均值差异无统计学意义,但显示E2组<El组；G1组、G2组、G3组三组间HCG日E2水平、获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数均有显著性差异(P<0.001),且均为G1组>G2组>G3组。结论1.D3形态学低评分胚胎继续体外培养若能形成囊胚尤其是优质囊胚,则同一周期的D3优质胚胎发育潜能较好,新鲜胚胎移植周期的临床结局及D3优质胚胎移植完时的累积临床结局较好。2.有囊胚、优质囊胚形成的周期其卵巢储备功能好于无囊胚、无优质囊胚形成周期。3.在有囊胚形成周期中,随着囊胚率的增加,IVF/ICSI-ET的妊娠率、种植率及D3优质胚胎移植的累积妊娠率也有提高趋势。在有优质囊胚形成周期中,随着优质囊胚率的增加,IVF/ICSI-ET的妊娠率、种植率及D3优质胚胎移植累积妊娠率、累积种植率均无增加趋势。4.在有囊胚、优质囊胚形成的情况下,随着HCG日E2水平、获卵数、成熟卵子数、受精数、卵裂数的增加对囊胚、优质囊胚形成有负面影响。第三部分冻融周期卵裂期与囊胚期胚胎移植的临床结局比较目的探讨冻融周期中移植卵裂期优质胚胎与D3形态学低评分胚胎来源的囊胚间临床结局的差异,及在囊胚移植周期中移植不同数量和质量的囊胚组间临床结局差异。方法1.研究对象回顾性研究2012年04月至2014年12月在南方医院生殖中心接受FET的1695个冻融周期。1.1纳入标准如下(满足下述所有标准)：(1)、促排卵周期采用黄体中期降调的长方案；(2)、新鲜周期将D3优质胚胎移植或冷冻后还有剩余的低评分胚胎行囊胚培养；(3)、新鲜周期移植未妊娠或取消移植,2-3个月后行自然周期(NC-FET)、无垂体降调节的激素替代周期(HRT-FET)、促排卵周期冻融胚胎移植；(4)、冻融周期移植2至3个卵裂期胚胎或1至2个囊胚期胚胎；(5)、20岁≤年龄≤45岁；(6).16 kg/m2≤MI≤30 kg/m2;1.2排除标准(符合下述任一标准)：(1)、新鲜周期行coasting方案；(2)、新鲜周期行两步移植或囊胚移植者,冻融周期行两步移植者；(3)、子宫畸形、子宫器质性病变者以及既往有盆腔结核病史者；(4)、赠卵或使用供卵周期。2.研究分组在这收集的1695个FET周期中,将移植2-3个卵裂期优质胚胎的FET列为A组,移植2个优质囊胚的FET列为B组,移植一个优质囊胚和一个非优质囊胚的FET列为C组,移植一个优质囊胚的FET列为D组。主要分别比较A组与B组间、B组与C、D组间的临床妊娠率、胚胎种植率、多胎妊娠率、自然流产率。3.统计方法同第二部分。结果1.冻融周期中移植卵裂期优质胚胎组和移植D3低评分胚胎来源的囊胚组间临床妊娠率、胚胎种植率、多胎妊娠率均无显著性差异(P>0.05),但移植D3形态学低评分胚来源的囊胚组其流产率显著高于卵裂期优质胚胎组(P<0.05)。2.冻融周期中移植两个优质囊胚组的临床妊娠率及多胎率显著高于移植一个优质囊胚组(P<0.05),两组间的胚胎种植率及流产率均显著性差异(P>0.05)。移植一个优质囊胚和一个非优质囊胚组与移植两个优质囊胚组、移植一个优质囊胚组间的临床妊娠率、种植率、多胎率、流产率均无显著性差异(P>0.05)。结论1.D3形态学低评分胚胎有一定的发育潜能,且形成的优质囊胚移植可获得与移植卵裂期优质胚胎相似的妊娠率及种植率,但其流产率高于移植卵裂期优质胚胎,可能因为D3形态学低评分胚胎来源的囊胚有较高的染色体异常率。2. 冻融周期中移植来源于D3形态学低评分胚胎的囊胚,其妊娠率与移优质囊胚移植的数量相关。