大叶藻内生放线菌的分离及其活性次级代谢产物的研究

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放线菌是生物活性物质的主要来源。由于抗生素的广泛使用或滥用,细菌对抗生素的耐药性已经成为临床上的一个主要问题。发现新的微生物资源和新的先导化合物变得越来越重要。大叶藻是构成海草床的主要藻类。由于海草床独特的生存环境,大叶藻体内蕴含了丰富的微生物资源。目前,对于大叶藻的研究主要集中在生态修复方面,但是大叶藻中的放线菌资源及其活性产物的研究报道还很少。因此,对威海海域大叶藻内生放线菌的研究将丰富滨海植物内生放线菌的资源,为发现新的天然产物提供有利途径。采用纯培养的方法,对从山东省威海市双岛湾海域采集的大叶藻样品中的内生放线菌进行分离。采用纸片法对分离到的放线菌发酵产物粗提物进行7种指示菌的抗菌活性筛选。采用固体发酵的方法对活性较好的放线菌菌株DYZ076进行次级代谢产物的积累,然后采用天然产物分离技术对菌株的发酵产物粗提物进行化合物的分离,利用现代波谱技术及文献比对进行化合物的结构解析。采用ISP2等7种培养基从大叶藻样品中共分离到134株内生放线菌,其中83株来自于根,51株来自于叶。在134株放线菌中,有100株放线菌至少对1种指示菌具有抑制作用,占总数的74.63%,有27株放线菌对2种指示菌有抑制作用,有19株放线菌对3种指示菌有抑制作用,有16株放线菌对4种指示菌有抑制作用,有1株放线菌对5种指示菌有抑制作用。放线菌对革兰氏阳性指示菌有抑制作用的菌株多于对革兰氏阴性指示菌的抑制。采用大米固体培养基对放线菌DYZ076进行代谢产物的积累。TLC分析结果显示该菌株的代谢产物丰富。硅胶柱层析得到10个次级代谢产物,其中组分8的抗菌活性较好。对组分8进行HPLC半制备高效液相色谱分析,得到组分8-4的抗菌活性最好。对组分8-4进行结构测定和参考文献对比,最终确定组分8-4是放线菌素D。结果表明,大叶藻内生放线菌资源丰富,且具有良好的抗菌活性。
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