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研究背景胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,是全球第七大常见的癌症死亡原因。目前胰腺癌主要有手术治疗、化学药物治疗、放射治疗、免疫治疗等多种治疗方法,但是胰腺癌的预后仍然很差,五年生存率仅为7%。因此,目前迫切需要发现新的有效的治疗胰腺癌的方法。为了克服传统癌症治疗方法的不足,越来越多的研究人员致力于分子靶向治疗的研究。理想的分子靶向治疗药物能够特异地选择肿瘤细胞内某个致癌靶位点与之相结合发生作用,从而特异地抑制肿瘤细胞的生长增殖,进而导致肿瘤细胞的死亡。癌基因成瘾概念的提出为肿瘤的分子靶向治疗研究提供了良好的生物学基础,已经成为当前抗癌药物研发及癌症治疗的重要研究热点。在前期研究中,我们已经鉴定出多种短寿命蛋白的快速降解可能与癌细胞中成瘾癌基因急性抑制后发生的急性凋亡有关,T复合蛋白1亚基α(T-complex protein 1 subunit alpha,TCP-1-alpha,简称 TCP1α、CCT1)就是其中的蛋白之一。TCP1α是构成分子伴侣复合物TRiC(也称TCP-1、CCT)的一种亚基,当前已有多项研究显示TRiC亚基在多种肿瘤标本中过表达,包括肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌等,并且发现多种亚基对于肿瘤的发生发展起着至关重要的作用。但是,目前关于TCP1α在胰腺癌中的相关研究还知之甚少。因此,本课题将重点研究TCP1α在胰腺癌发生发展中的作用,为胰腺癌的发病机制及靶向治疗提供理论和实验依据。研究目的胰腺癌起病隐匿,发展迅速,早期诊断及治疗困难,是预后最差的消化系统恶性肿瘤之一。因此,目前迫切需要发现新的有效的靶向治疗方法。本课题旨在阐明TCP1α在胰腺癌组织标本中的表达及其在胰腺癌发生发展中的作用。研究方法(1)应用免疫荧光技术评估TCP1α在人胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达情况。然后利用PROGgeneV2在线分析工具分析TCP1α的表达与患者预后的关系。(2)利用小干扰RNA技术沉默胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和PANC-1中TCP1α蛋白的表达,然后利用体外增殖实验(MTT法)、划痕实验和transwell迁移及侵袭实验检测抑制TCP1α表达对胰腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。(3)下调胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和PANC-1中TCP1α表达后,通过单独或联合抑制KRAS基因相关信号通路,观察是否能诱导急性凋亡。研究结果(1)免疫荧光结果显示,TCP1α在胰腺癌组织中呈较强荧光表达,在相应癌旁正常胰腺组织中呈弱荧光表达。PROGgeneV2在线分析显示,高TCP1α表达与胰腺癌患者预后不良相关。(2)Western blot验证特异性siRNA靶向沉默胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和PANC-1中TCP1α表达的效果。结果表明,三种siRNA-TCP1对MiaPaCa-2和PANC-1细胞中TCP1α表达的干扰率分别为51%、72%、69%和59%、72%、44%,其中siRNA-TCP1α-2干扰效果最好,具有统计学意义(P<0.05)。(3)沉默TCP1α表达可明显抑制胰腺癌细胞株MiaPaCa-2和PANC-1的体外增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。(4)沉默TCP1α表达可明显促进胰腺癌细胞发生急性凋亡。将LY294002(50μM)、PD98059(40μM)和CHX(10μg/ml)这三种抑制剂的不同组合用于处理已转染siRNA沉默TCP1α表达的MiaPaCa-2和PANC-1胰腺癌细胞株,处理6小时后检测凋亡-特异性裂解的PARP。Western Blot检测结果显示,抑制TCP1α表达结合MEK1/ERK1/2抑制剂PD98059和蛋白质合成抑制剂CHX可明显促进胰腺癌细胞发生急性凋亡。结论(1)TCP1α在胰腺癌组织中呈高表达并且与患者预后不良相关。(2)沉默TCP1α的表达可明显抑制胰腺癌细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力。(3)沉默TCP1α表达能够部分促进胰腺癌细胞急性凋亡的发生。