论文部分内容阅读
目的新辅助放化疗或者根治性放化疗被认为是局部进展期食管鳞状细胞癌的标准治疗方式,放疗在食管鳞癌的综合治疗策略中居核心地位。NS1-BP蛋白属于BTB-kelch蛋白家族,既往的研究表明NS1-BP通过抑制c-Myc的表达抑制Hela细胞的增殖。但是NS1-BP在人类肿瘤中的作用目前还不明确。本研究的目的是探讨NS1-BP在食管鳞癌中的表达及其对细胞放化疗敏感性的影响和潜在机制。方法我们首先从两个不同的肿瘤中心搜集了144例食管鳞癌病人治疗前的活检标本,这些病人都接受了相同的治疗方案。通过免疫组化的实验方法检测了两个中心的所有肿瘤组织活检标本和30例正常的食管黏膜组织中NS1-BP蛋白的表达情况,探究NS1-BP在食管鳞癌中的发生、发展中的作用及其对临床的预后意义。进一步,构建了NS1-BP稳定过表达的食管癌细胞株(NS1-BP组)和对照细胞。使用免疫印迹技术检测各组间NS1-BP蛋白的表达差异,同时使用MTT法以及流式细胞技术检测NS1-BP过表达后食管鳞癌细胞的增殖及凋亡是否发生改变。最后,给予电离辐射干预后,通过一系列的体内、体外研究探求了NS1-BP对食管鳞癌细胞放疗敏感性的影响和分子机制。结果1、NS1-BP在食管鳞癌组织及细胞系中呈现相对低表达的趋势免疫组化分析对比了两个中心中的肿瘤组织和正常的食管黏膜组织的NS1-BP的表达。相较于正常的食管黏膜组织,NS1-BP在食管鳞癌组织的表达降低。细胞学实验表明,NS1-BP在肿瘤细胞系中的表达均低于正常食管黏膜鳞状上皮细胞中的表达。2、NS1-BP的低表达和病人的放化疗抵抗相关我们根据免疫组化的评分标准,将病人分为两组:NS1-BP高表达组和NS1-BP低表达组。随后我们分析了两个中心的临床资料,结果表明NS1-BP的低表达与病人的放化疗抵抗呈正相关。生存分析表明NS1-BP低表达的患者无病生存期明显低于NS1-BP高表达的患者。3、NS1-BP抑制了食管鳞癌细胞的增殖,促进了食管鳞癌细胞的凋亡我们在NS1-BP表达相对适中的食管鳞癌细胞系TE-1及Kyse-30细胞系中,通过转染过表达NS1-BP。MTT及Annexin V/PI双染实验结果显示,NS1-BP明显抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡的发生。我们随后干扰了NS1-BP的表达,得到了一致的研究结果。4、NS1-BP的表达水平影响食管鳞癌细胞系对放射治疗的敏感性我们通过平板克隆实验来检测过表达NS1-BP后细胞克隆形成率的变化,通过Annexin V/PI双染实验检测过表达NS1-BP后放疗诱导的细胞凋亡的变化,通过免疫荧光的实验方法过表达NS1-BP后,在放射治疗后24小时的γ-H2AX的变化,通过蛋白印迹的实验方法检测检测凋亡蛋白的变化。这些实验结果表明,NS1-BP增强食管鳞癌细胞系对放射治疗的敏感性。我们随后干扰了NS1-BP的表达,得到了一致的研究结果。同时,裸鼠成瘤实验证实NS1-BP的过表达可以增加食管鳞癌细胞对放疗的敏感性。5、NS1-BP通过转录负调控c-Myc的表达抑制了Myc信号通路我们通过免疫印迹的实验方法观察到过表达NS1-BP后c-Myc的表达下降,c-Myc减少后,细胞周期检查点所需的关键蛋白质也被改变。此外,过表达NS1-BP明显抑制了放疗诱导的ATM/Chk1磷酸化,但对Chk2磷酸化没有影响。为了进一步评估NS1-BP抑制c-Myc表达的机制,我们使用了荧光素酶报告实验及染色质免疫沉淀的实验方法,研究结果表明NS1-BP转录负调控c-Myc的表达。结论我们的研究强调了NS1-BP在食管鳞癌病因学及放射治疗学中的重要作用。靶向NS1-BP/c-Myc通路也许为食管鳞癌患者提供一个新的治疗策略。