论文部分内容阅读
目的:通过PCR方法系统性检测人源57种CYP450(cytochromeP450)基因在CD34(+)人脐带血造血干/祖细胞(cord blood hematopoietic stem and early progenitor cells, CBHSPCs)中的表达,并通过real time PCR进一步检测CYPlB1和CYP2R1在总单核细胞(total mononuclear cells, MNCs)和CD34(+)CBHSPCs中的基因相对表达量。方法:使用鼠抗人CD34单抗免疫磁珠,以人IgG作为阻断剂,通过免疫磁珠分选方法(magnetic cell sorting, MACS)从人脐带血中分选纯化CD34(+)CBHSPCs。使用荧光素PE标记的CD34抗体,以荧光素PE标记的鼠IgG2a单抗作为同型对照,通过流式细胞仪检测分选到的细胞群中CD34(+)细胞的纯度。Trizol法提取CD34(+)CBHSPCs中的RNA,用57种CYP450基因的特异性引物进行PCR扩增反应,并对扩增产物进行测序分析,以筛选出在CD34(+)CBHSPCs中有表达的CYP450基因。利用real time PCR方法,对CYP1B1和CYP2R1在MNCs和CD34(+)CBHSPCs中的相对基因表达差异进行定量分析。所有实验都至少重复三次。结果:PCR结果显示,在人源57种CYP450基因中有14种在CD34(+) CBHSPCs中被检测到有表达,这14种CYP450基因分别是CYP1A1, CYP1B1, CYP2E1, CYP2C18, CYP2C19, CYP2J2, CYP2R1, CYP2S1, CYP2U1, CYP4F2, CYP4V2, CYP20A1, CYP27A1和CYP51A1。 Real time PCR结果显示,CYP2R1在CD34(+)CBHSPCs中呈现高表达,而CYP1B1在MNCs中的表达水平明显高于CD34(+)CBHSPCs中的表达水平。结论:本课题首次系统性检测所有在人源57种CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中的表达谱。实验结果显示有14种CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中被检测到表达。Real time PCR结果显示,CYP2R1在CD34(+)CBHSPCs中的表达水平明显高于在MNCs中的表达水平,而CYP1B1则与之相反。本课题为进一步检测CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中的生物学功能奠定理论基础,实验数据提示细胞色素P450氧化酶在其已熟知的生物学功能外,可能也参与造血作用中的功能细胞分化与成熟。