甲型流感(InfluenzaA,IVAs)是感染甲型流感病毒所引起的急性呼吸道传染病。流感病毒的基因容易发生重配,尤以甲型流感病毒的变异性最强。甲型流感病毒不仅能导致严重的呼吸系统症状,还可以引起世界范围内的大流行,因其广泛传播为人们所熟知。近年来,H7N9亚型时有暴发,给人们的身心健康和社会的稳定带来一定的威胁。鉴于人们罹患流感病毒的比例和医院的就诊人数在不断增加,流感病毒的分离和检测就显得尤为重要。第一部分的内容是运用Real-Time PCR和微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,DDPCR)的技术对流感病毒核酸分子进行检测。我们从临床呼吸道感染样本中提取病毒RNA,用一步法PCR扩增,根据构建标准曲线和标准品扩增曲线,并将样本与标准品的Cq值进行比较分析筛选出阳性结果。鉴于Real-Time PCR得到的阳性率偏少,我们设计了 A型(A1亚型、A3亚型、A5亚型和A7亚型)和B型的引物序列,对所有样本又都进行了 DDPCR的检测,从结果中我们可以得出样本的具体拷贝数。比较Real-Time PCR和DDPCR检测阳性的样本数目,我们发现DDPCR得到的阳性数远多于Real-Time PCR。由于时间的关系并为了进一步鉴定流感病毒的感染,最后我们选择拷贝数最多的那株接种于MDCK细胞,传代培养几代后细胞发生病变。由此得出结论,DDPCR的检测灵敏度更高。第二部分的内容是对一株H7N9病毒的分离和鉴定。从昆明市CDC那里拿到已经加过TRIZOL的样本,回来提取核酸后,进行PCR反应扩增。首先用特异性引物PCR得到HA和NA的基因片段,在线BLAST后发现它与另外一株H7N9病毒的相似度很高。然后我们对这株病毒的其他六个基因片段均进行了PCR检测。对比分析表明这两株在HA、NA、M、NS、NP、PA、PB1基因中核苷酸的同源性≥99%,PB2基因同源性为100%。进化树分析也显示它们来源于同一个进化支上,同属于长三角谱系。根据家庭位点突变分析并结合流行病学调查的结果我们发现这两株病毒来源于一对母女且母亲有被她女儿感染的可能性,最后确定此毒株为H7N9亚型。我们在这株病毒NA基因上检测到了 R292K突变,表明了奥司他韦耐药性。通过本次实验,我们分离出一株H7N9病毒并发现H7N9感染在人与人之间有限传播的可能性。