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目的构建血管生成素（ANG）基因siRNA干扰质粒，并检测其对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响以及初步探讨其分子机制。方法1.设计并构建针对人ANG基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体，通过SalI酶切和DNA测序鉴定载体后，再转染膀胱癌T24细胞，G418筛选稳定表达的细胞株，分别命名为T24-siANG1、T24-siANG2、T24-NC，经Q-RCR，Western Blot检测干扰的有效性。2.HE染色观察细胞形态；MTT检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期；激光共聚焦检测ANG与RI相互关系；细胞免疫荧光检测蛋白ANG、RI、p-AKT、p-GSK3β、p-mTOR表达水平。3.流式细胞术检测细胞凋亡率；Tunel和Hochest33342凋亡试剂盒检测细胞凋亡；Western blot检测蛋白ANG、RI，细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3、Bcl-2，信号通路蛋白AKT、GSK3β、mTOR、p-AKT、p-GSK3β、p-mTOR表达水平。4.构建裸鼠移植瘤模型，观察移植瘤生长并计算抑制率；CD31抗体，HE染色观察肿瘤微血管生长以及肺组织自发转移情况；组织免疫荧光检测蛋白RI、ANG、p-AKT、p-GSK3β、p-mTOR表达水平；免疫组织化学检测瘤组织中蛋白ANG、RI、Bax、Caspase-3、Bcl-2、p-AKT、p-GSK3β、p-mTOR、AKT、GSK3β、mTOR表达水平。结果1.测序结果显示：重组质粒构建成功；Q-PCR，Western Blot分析T24-siANG1组ANG的mRNA，蛋白表达显著抑制，与T24-NC组相比（p<0.05）。2.HE染色结果显示：与对照组相比，实验组T24-siANG1组的细胞恶性程度降低，表现为细胞不重叠生长，细胞核变小，核质比减少，呈弱嗜碱性细胞质；MTT结果显示：T24-siANG1组较T24-NC及T24组细胞增殖能力明显下降；流式细胞分析结果表明：T24-siANG1组较两对照组细胞生长阻滞于G1期，S期和G2期降低；激光共聚焦检测ANG与RI蛋白具有共定位关系；细胞及组织免疫荧光检测结果显示：ANG，信号通路关键蛋白p-AKT，p-GSK3β，p-mTOR表达降低，而RI的表达增高。3.流式细胞分析结果表明：流式细胞仪检测结果显示：T24-siANG1组细胞有（30.23±15.81）％的凋亡细胞，而T24-NC组和T24细胞组仅有(5.44±3.09)％和(3.96±1.58)％的凋亡细胞，T24-siANG1组较T24-NC组细胞凋亡率明显增高（p<0.01）；TUNEL检测结果显示：T24-siANG1组出现大量凋亡细胞；Hochest检测结果显示：T24-siANG1组出现典型凋亡形态特征：染色质凝集，核碎裂和明亮的蓝色荧光等；Western blot结果显示：与T24-NC组相比，T24-siANG1组Bcl-2的表达明显降低(p＜0.05),而Bax和激活的Caspase3的表达明显升高(p＜0.05)；T24-siANG1组较T24-NC组的信号通路蛋白p-AKT，p-GSK3β，p-mTOR的表达显著降低(p＜0.01)，而RI蛋白表达水平明显升高(p＜0.05)。4.裸鼠在皮下注射各组细胞后，与T24-NC组相比，T24-siANG1组的移植瘤重明显降低；组织免疫荧光CD31及HE染色实验结果均表明：与两对照组相比，T24-siANG1组瘤组织中微血管明显减少。肺组织HE染色结果显示：T24-siANG1组肺组织未见明显转移，而两对照组在大血管附近可见细胞核增大且染色较深的细胞，表明已发生远处转移。免疫组织化学检测结果显示：T24-siANG1组瘤组织中蛋白RI， Bax，Caspase-3表达明显升高，而Bcl-2，ANG，p-AKT，p-GSK3β，p-mTOR表达明显降低， AKT，GSK3β，mTOR的表达无变化，与Western blot结果一致。结论体内外实验均证实：成功构建的ANG siRNA干扰质粒通过调控ANG信号通路及凋亡蛋白抑制膀胱癌T24细胞的增殖并促进其凋亡。