基于腊梅花EST序列的抗性基因分析及几丁质酶基因克隆与表达

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腊梅零下低温开花的特点预示着其花中含有适于低温生存的物质。以腊梅花为材料,研究其低温抗性物质对于解析植物的抗低温机制、分离并利用低温抗性相关物质具有重要的理论和现实意义。本研究通过SMART法构建了原始滴度为1.16×105cfu/mL,重组率为96.43%的腊梅花抗性cDNA文库,并对测序成功的955条EST序列进行比对分析,其中含有73.93%编码已知功能基因,12.88%编码预测功能基因。采用GO分类,获得419条与分子功能相关EST,进一步分析发现其中54种与植物抗低温相关,且多存在于植物非原质体中。在已知的EST中发现编码19家族ClassIb型胞外几丁质酶的基因,该类型几丁质酶具有抑菌抗冻等多抗性,研究腊梅花中的几丁质酶有利于揭示几丁质酶的抗低温机制。本研究首先检测腊梅非原质体蛋白的几丁质酶活性初步验证其存在于胞外,进而构建其原核表达载体,并对其生物功能进行验证。
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