甜瓜酸性转化酶基因表达特性分析及功能鉴定

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunwen_fly
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本文以厚皮甜瓜M01-3(Cucumis melo. L.)自交系为试验材料,采用子房注射法将含有CaMV35S启动子和Nos终止子的反义酸性转化酶基因植物表达载体(anti-MAI1)转化甜瓜。运用PCR、Southern Blot、PCR-Southern Blot和Northern Blot对转化植株的T0和T1代进行了分子鉴定。测定了转基因植株T1代果实发育期的蔗糖、葡萄糖和果糖以及转化酶活性和其它生长势等指标,旨在研究AI基因在甜瓜果实发育和糖分积累中的功能,为利用分子生物学手段进行甜瓜品质育种提供理论依据。主要结果如下:1、利用子房注射法,将anti-MAI1基因转化甜瓜果实,应用PCR和Southern Blot对后代进行分子鉴定,在获得的330株成苗中,共鉴定出2株转基因植株,转化效率为0.6%,且均有两个拷贝。PCR-Southern Blot鉴定结果表明,anti-MAI1基因已在T1代转基因植株稳定遗传。2、提取对照和T1代转基因植株甜瓜根、茎、叶、花和不同发育期果实的总RNA,以地高辛标记的RNA探针进行Northern杂交。结果表明,不同组织中AI基因表达差异明显,在对照果实各发育时期均有不同程度的表达,而转基因果实只有发育初期AI基因有少量表达,果实发育的中后期AI基因表达量受到了不同程度的抑制。3、对对照和T1代转基因植株甜瓜果实各发育期的蔗糖、葡萄糖、果糖、酸性转化酶和中性转化酶进行了测定,结果表明转基因果实蔗糖含量有不同程度的提高,而葡萄糖、果糖含量和酸性转化酶活性均降低,但中性转化酶活性变化不大。说明AI基因对果实的糖分组成具有调控作用,且进一步证明酸性转化酶活性的下降是蔗糖积累的关键因素和必要前提。4、对对照和T1代转基因植株生长势和果实质量积累动态等指标进行了测定,结果表明转基因植株生长势变弱,果实单果重降低,说明AI基因对甜瓜植株生长和果实发育也具有调控作用。
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