钙库调控钙离子通道(store-operated calcium channel, SOC)是一种在多种细胞中存在的钙离子通道。其基本的门控机制是当胞内钙库逐渐排空时,位于钙库膜上的信号分子STIM1(stromal interaction moleculel)将会聚集并与细胞膜上的SOC通道蛋白Orai1相互结合,改变其构象并打开通道。SOC通道可以调控许多生理功能,比如可以调控一些基因的转录、胞内某些酶的活性以及细胞的胞吐作用等等。同时,SOC通道功能的异常也与一些疾病相关,比如重症联合免疫缺陷综合症等。而目前由于已知的SOC通道的拮抗剂和激动剂数量有限,且基本上都没有特异性,使得人们对SOC通道的深入了解受到了阻碍。本论文针对这一点利用果蝇S2细胞,应用胞内荧光强度检测的实验方法构建了SOC通道特异分子的筛选模型,并利用该模型对部分从中草药中提取的小分子化合物进行筛选。经反复验证,最终得到了一个有拮抗效果的小分子科罗索酸,并初步研究了科罗索酸对SOC的拮抗机制。1.SOC通道特异分子筛选模型的构建选择果蝇S2细胞作为SOC通道特异分子筛选的细胞模型。经摸索,发现25℃、无CO2的培养条件是较适宜S2细胞生长的条件。在该培养条件下,应用SOC通道激动剂TG、胞内钙探针Fluo-4AM以及FlexStation细胞内钙检测的技术,构建了SOC通道特异分子筛选的基本细胞模型,并利用该模型对三种已知的钙通道拮抗剂Gd3+、SKF-96365和2APB进行测试。结果显示,基本模型能够很好地检测出这三种拮抗剂对SOC通道的作用特性及效果,表明基本细胞模型是可靠、稳定的；为后续的药物筛选实验打下了基础。2.天然提取化合物的筛选及活性化合物的作用机理初探应用所构建的SOC通道特异分子的筛选模型,对本所从中草药中所分离出的小分子化1选。经验证,最终得到了一个对SOC通道有拮抗效果的小分子化合物科罗索酸。之后,我们对科罗索酸的拮抗机理进行了探索,发现科罗索酸能够拮抗内质网释放钙离子,推测科罗索酸可能通过阻碍内质网的排空进而拮抗SOC通道。