【摘 要】
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睾丸特异性蛋白50(TSP50)基因是一种新发现的基因,在大多数的乳腺癌患者出现异常的高表达,提示这个基因可以作为乳腺癌的分子标记物。在目前的研究中TSP50被认为可能是一种致
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睾丸特异性蛋白50(TSP50)基因是一种新发现的基因,在大多数的乳腺癌患者出现异常的高表达,提示这个基因可以作为乳腺癌的分子标记物。在目前的研究中TSP50被认为可能是一种致癌基因。TSP50基因的产物同许多丝氨酸蛋白酶有相似的结构,但是最关键的催化部位,丝氨酸已经被苏氨酸所取代,因此它可能被归为一种新的蛋白酶。我们利用TSP50活性中心部位的50肽,pep-50为靶抗原,从噬菌体展示抗体库筛选抗TSP50单链抗体(scFv)。经四轮筛选,从抗体库中获得经ELISA检验与TSP50有较强的亲和性的3个克隆(A1、A11和C8),对不同抗原决定簇的互补决定区(CDR)测序发现含有重链和轻链的单链抗体可变区基因。将scFv-A1和scFv-A11基因克隆到表达载体pPELB上,并在E.coli Rosetta成功进行可溶性蛋白表达。从1L培养物中可获得4.0—5.0 mg左右蛋白表达物。表达的蛋白通过离子交换层析和固相金属离子亲和层析(IMAC)两步进行纯化,纯化的蛋白在SDS-PAGE的31 KDa位置上显示一条单一的带。ELISA检查结果证实,表达的单链抗体蛋白能够与对应TSP50特异多肽pep-50有特异性
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