用纯化的伪狂犬病病毒（PrV）免疫BALB/C小鼠，取脾细胞与NS₀骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA和固相化ELISA筛选，3次有限稀释法克隆，获得了1株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为OH₆。经鉴定该单抗为IgG₁亚类，杂交瘤细胞的平均染色体数目为97条，杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1：1024和1：204800。OH₆株单克隆抗体与猪繁殖-呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应，显示良好的特异性。连续培养21代，OH₆杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体。利用OH₆杂交瘤细胞株的小鼠腹水单克隆抗体建立了检测PrV的McAb-AC-ELISA检测方法。经测定，单克隆抗体的最适包被浓度为2.04ug／ml，兔抗PrV高免血清的最适工作浓度为1：8000。其检测灵敏度为5.5ng／ml，与常见的猪的几种传染病病原无交叉反应，与病毒分离对比检查试验有较高的符合率。用该检测方法对自然发病猪的组织脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑、扁桃体）进行检测，结果发现在扁桃体、脑和肺中PrV的检出率最高，其次为心、肝、脾、肾。McAb-AC-ELlSA的建立为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏、应用广泛的PrV检测方法。