论文部分内容阅读
背景与目的子宫内膜癌是女性生殖系统恶性肿瘤最常见的三大肿瘤之一,具体发病机制不详。以肥胖、高血压、2型糖尿病为主要表现的代谢综合征(MS)是子宫内膜癌发病的高危因素。MS是一组多种代谢物质异常聚集造成代谢紊乱的症候群,其病理生理基础是胰岛素抵抗及继发的高胰岛素血症,继而并发2型糖尿病。胰岛素生长因子(Insuline-like growth factor,IGF)系统是胰岛素抵抗的中心环节,在能量代谢方面发挥重要作用还与多种肿瘤的发生发展密切相关。IGF系统包括胰岛素生长因子(IGF)及其受体,胰岛素生长因子结合蛋白(insulin like growth factor binding proteins,IGFBPs)及相应的水解酶。胰岛素生长因子相关蛋白结合蛋白1(insulin like growth factor binding protein-related protein,IGFBP-r P1)是IGFBPs超家族中的一名新成员,与IGFBP-r P1结合后的胰岛素失去活性,降低外周血胰岛素有效活性,进而引起胰岛素抵抗。研究证明IGFBP-r P1在结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌中作为一种抑癌基因发挥作用,其在子宫内膜癌中的作用未见报道。MEK/ERK信号通路异常与肿瘤的发生发展密切相关,在多种致瘤性疾病中表达是上调的,通路持续激活,细胞增殖失控,凋亡受阻。在口腔癌、黑色素瘤、乳腺癌中都可发现ERK1/2信号通路的过度激活。采用添加外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-r P1)联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059,观察其对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖凋亡的影响,探讨IGFBP-r P1对子宫内膜癌发挥作用的机制。方法1.体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞,向培养基中添加不同浓度人重组胰岛素生长因子结合蛋白相关蛋白1(Recombinant Human IGFBP-r P1,rh IGFBP-r P1)和PD98059,人为上调IGFBP-r P1的水平。2.采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测不同浓度rh IGFBP-P1及rh IGFBP-P1联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059对HEC-1A细胞增殖的影响。3.蛋白免疫印迹(western blot)法分析不同浓度rh IGFBP-r P1作用下子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞总的ERK1/2和磷酸化ERK1/2水平变化。4.统计学方法:采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,所得结果以均数±标准差(s)表示,采用单因素方差分析进行检验。以检验水准α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.CCK-8法示添加rh IGFBP-r P1子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖受到明显抑制,其抑制作用呈浓度和时间依赖性,2μg/ml,4μg/ml,8μg/ml,16μg/ml的rh IGFBP-r P1对HEC-1A的抑制率分别是(16.58±1.72)%,(30.04±0.94)%,(58.74±1.29)%,(81.89±0.87)%,(P<0.05),IC50=6.39μg/ml;4μg/ml r IGFBP-r P1对HEC-1A增殖抑制作用随着时间延长越来越明显,12、24、48、72小时增殖抑制率分别为(8.25±2.65)%、(13.98±1.41)%、(24.82±1.90)%、(30.04±0.94)%(P<0.05)。2.MEK/ERK通路抑制剂PD98059能增强其抑制作用,r IGFBP-r P1(4μg/ml)与PD98059(25umol/L)联用,以上各时间点细胞增殖抑制率分别增至(10.04±2.71)%、(17.02±1.58)%、(28.59±2.04)%、(35.29±1.12)%(P<0.05),western blot示添加rh IGFBP-r P1,磷酸化的ERK1/2水平显著降低,磷酸化的ERK1/2水平与rh IGFBP-r P1呈剂量依赖性。结论1.rh IGFBP-r P1作用于子宫内膜癌细胞HEC-1A,对HEC-1A细胞的增殖抑制率呈明显的时间和浓度依赖性。2.MEK/ERK通路抑制剂PD98059能增强rh IGFBP-r P1抑制作用,HEC-1A细胞增殖抑制率呈剂量依赖性。3.IGFBP-r P1可以通过MEK/ERK信号通路抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖。