论文部分内容阅读
目的:间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)和免疫细胞作为肿瘤微环境中的重要细胞成分与肿瘤生长密切相关,免疫细胞是否通过影响肿瘤相关MSCs从而影响肿瘤的发展研究较少。本研究重点关注CD4+T淋巴细胞作用后胃癌间质干细胞(gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cells-like cells,GC-MSCs)对胃癌生长影响及潜在分子机制。方法:磁珠分选健康人外周血CD4+T淋巴细胞,采用CD3和CD28功能性抗体活化后与GC-MSCs共培养24h后,撤除CD4+T淋巴细胞,GC-MSCs单独培养24h,收集培养上清即CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs上清。将上述培养上清处理胃癌细胞SGC-7901,体外采用Transwell实验和Annexin V/PI双染色法流式细胞术检测胃癌细胞SGC-7901迁移和凋亡情况。体内建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,比较CD4+T淋巴细胞作用前后GC-MSCs对胃癌细胞SGC-7901致瘤能力的影响。采用免疫荧光、流式细胞术、western blot及定量PCR分别检测与CD4+T淋巴细胞共培养后GC-MSCs中程序性死亡受体配体1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)蛋白和m RNA表达情况。Western blot检测分析CD4+T淋巴细胞处理后GC-MSCs中p-stat3活性与PD-L1表达相关性,进一步采用p-stat3抑制剂预处理GC-MSCs,观察CD4+T淋巴细胞对GC-MSCs中PD-L1表达的影响。采用定量PCR检测CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs中与肿瘤生长相关的炎性分子(IL-6、IL-8、CCL2、TGF-β、IDO)的表达。流式细胞术检测分析CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs表面标记表达情况。结果:CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs上清体外显著促进胃癌细胞迁移,但对胃癌细胞凋亡无明显影响。体内皮下移植瘤模型生长曲线分析显示CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs上清可明显增强胃癌细胞致瘤能力。CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs中PD-L1表达显著增加,并与p-stat3活化高度相关。抑制GC-MSCs中p-stat3活性可减弱CD4+T淋巴细胞上调GC-MSCs中PD-L1表达。CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs中促肿瘤相关炎性因子m RNA表达水平显著升高,对GC-MSCs表面标记表达无影响。结论:CD4+T淋巴细胞作用后GC-MSCs可显著促进胃癌发展,可能与作用后GC-MSCs促肿瘤炎性因子分泌和PD-L1表达上调相关,本研究的完成将为免疫细胞调控肿瘤相关MSCs发挥促肿瘤作用及机制提供新的实验依据。