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为了观察不同缺血时间,不同再灌流时间大鼠大脑皮质不同区域神经细胞和星形胶质细胞的形态学变化,本实验选取42只SD大鼠,随机分为7个组,各组分别为:对照组(C)、缺血15min再灌流后6h组(15m-6)、缺血2h再灌流后6h组(2h-6)、缺血15min再灌流后12h组(15m-12)、缺血2h再灌流后12h组(2h-12)、缺血15min再灌流后24h组(15m-24)和缺血2h再灌流后24h组(2h-24),每组6只。通过结扎左侧颈总动脉,动脉夹夹闭右侧颈总动脉15min或2h松开动脉夹恢复血流,然后分别存活6h、12h、24h的方法构建脑缺血再灌流模型。动物处死后采用Nissl染色,GFAP免疫组化方法在光镜下,分别观察海马CA1、CA2、CA3、CA4区、齿状回及顶叶皮质神经细胞和星形胶质细胞的形态学变化,并按体视学方法测算其体积密度(Vv)和表面积密度(Sv),结果如下:Nissl染色可见各缺血再灌流组神经细胞出现了程度不等的异常变化,缺血15min再灌流后6h即可见神经细胞轻度改变,包括细胞层排列紊乱,胶质细胞增生等,随着缺血和再灌流时间的延长,神经细胞出现水肿,尼氏体减少,细胞核固缩等现象,到缺血2h再灌流24h,可见神经细胞周围间隙增宽,细胞层变薄,尼氏体甚至消失等现象。GFAP免疫组化显示随着缺血再灌流后存活时间的延长,星形胶质细胞出现胞体增大,着色加深,突起增多、增粗等现象,到缺血2h再灌流后24h,则可见阳性细胞数量达到顶峰,细胞肥大深染,突起粗大变形。神经细胞Vv、Sv随着缺血再灌流后存活时间的延长而减少,其中海马区和齿状回各缺血再灌流组与对照组相比,差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01),顶叶皮质除缺血15min再灌流后6h组与对照组比较,无显著性差异外(P>0.05),其余各缺血再灌流组与对照组相比,均具有显著性差异(P<0.05)。同一再灌流时间下,缺血2h与缺血15min比较,各区缺血2h再灌流组神经细胞Vv,Sv比相应15min的要小,其中海马CA1、CA2区在缺血2h再灌流后6h、12h、24h与缺血15min比较具有显著性差异(P<0.05),而海马CA3、CA4及齿状回、顶叶皮质下降不明显(P>0.05)。15m-6组星形胶质细胞Vv、Sv与对照组相比无显著性差异(P>0.05),15m-12组海马CA1、CA2、CA3、CA4区、齿状回Vv、Sv与对照组相比,显著增加(P<0.05),而顶叶皮质与对照组无明显差异(P>0.05)。其余各缺血再灌流组与对照组相比,大脑皮质各区均具有显著性差异(P<0.05)。同一再灌流时间下,星形胶质细胞Vv、Sv在缺血2h与缺血15min比较:2h-6组与缺血15m-6组比较各区均无显著性差异(P>0.05),2h-12与15m-12,2h-24与15m-24比较发现,海马CA1、CA2和顶叶皮质有差异(P<0.05),而海马CA3、CA4及齿状回无显著性差异(P>0.05)。同一缺血再灌流条件下,不同区域比较:神经细胞与星形胶质细胞Vv、Sv在CA1区与CA2比较无显著性差异,CA3、CA4、齿状回和顶叶皮质两两比较无显著性差异,CA1、CA2与CA3、CA4、齿状回、顶叶皮质比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。同一区域左右两侧比较,结果表明,大脑皮质同一区域左右两侧的神经细胞和星形胶质细胞体视学参数均无显著性差异(P>0.05)。以上结果表明,大脑皮质神经细胞随着缺血再灌流时间的延长受损加重,而星形胶质细胞功能趋于活跃且与神经细胞损伤密切相关。