【摘 要】
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海洋丝状真菌在新化合物的发现中表现出很大的潜力,但在真菌中极低的同源重组率却限制了其分子生物学方面的研究。据报道,在除了酵母以外的其他真核生物中,非同源末端插入是
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海洋丝状真菌在新化合物的发现中表现出很大的潜力,但在真菌中极低的同源重组率却限制了其分子生物学方面的研究。据报道,在除了酵母以外的其他真核生物中,非同源末端插入是对损伤DNA进行修复的主要途径。因此,为了开发一个可应用于灰绿曲霉的高效基因打靶系统,我们鉴定并敲除了灰绿曲霉中的AgLigD基因,它在粗糙链胞霉中的同源基因是Mus-53,是一个控制非同源末端插入途径的关键基因。通过进一步的验证,AgLigD缺陷菌株的同源重组率由野生株的0%提高至85%,说明AgLigD基因确实是在灰绿曲霉的非同源末端插入途径中发挥作用。但是,无论是在生长发育表型上,还是转化率上,亦或是对诱变剂和紫外的敏感性上,AgLigD缺陷菌株都与野生株无明显差异。为了适应不同的环境条件,真菌界几乎所有的物种都需要光感应系统。光感应系统在菌株的生理过程中起到十分关键的作用,包括无性和有性发育的调节,昼夜节律钟的维持,次级代谢产物合成的调控等等。为了对光感应系统作进一步的研究,我们在海洋真菌灰绿曲霉中分别鉴定了Agwc1, Agwc2, AgveA, AgFphA这四个光调节受体基因,并通过多种生物信息学方法对其核苷酸和蛋白质序列进行了分析。同时还进一步对灰绿曲霉在不同光照条件下的生长、发育和次级代谢产物产量进行了研究,并得到了一些初步结论:灰绿曲霉在光照条件下会产生更多的分生孢子,说明菌株更多的向无性方向发育;而在黑暗条件下,相对于光照时会生成更多的子囊果,表明菌株在黑暗中更多的向有性方向发育。同时,我们发现红光对次级代谢产物灰绿霉素A的生成有一定的促进作用。
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