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目的:唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是唾液腺最为常见的恶性肿瘤之一，发生于唾液腺的任何部位。肿瘤恶性程度高，容易沿神经、血管浸润性生长，术后常复发，也可发生肺、骨、脑和肝等远处转移。由于肿瘤的恶性生物学行为，直接威胁患者生命，目前术后尚无有效的治疗方法。B淋巴细胞瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2）基因是一种抑制细胞凋亡的癌基因，在众多凋亡相关基因中bcl-2是目前最受关注的基因之一。定位于人的滤泡性淋巴瘤和正常B淋巴细胞染色体18号21区，含3个外显子和2个内含子，可编码26kD的bcl-2α和22kD的bcl-2β两种蛋白，其中bcl-2α是抑制凋亡作用发挥的主要蛋白，为线粒体膜的整合蛋白。它最先是在人类滤泡型淋巴瘤中发现，被认为是人类滤泡型淋巴瘤的细胞遗传学标志，但后来研究发现，它在人类肿瘤中有广泛意义。在许多肿瘤组织中，bcl-2基因的表达水平通常会发生改变，它与肿瘤的发生、发展及预后有关。RANi（RNA interference）即RNA干扰，是目前应用较广的一种基因研究技术，是由外源或内源的双链RNA（double strand RNA, dsRNA）导入细胞而引起的与dsRNA同源的mRNA降解，从而抑制其相应的基因表达。RNAi具有高特异性、高效性、高稳定性、可遗传性、可扩散性和浓度时间依赖性等特点。利用RNAi技术，在RNA水平特异性抑制特定基因的表达，使特定基因获得功能性丧失，从而成为研究基因功能的良好工具。本实验采用RNA干扰（RNAi）技术特异性沉默人唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞中的bcl-2基因，探讨基因沉默后SACC-83细胞的形态变化及凋亡情况。方法：1重组腺病毒的构建与鉴定：武汉淅玛生物技术公司受本实验室委托，设计并构建重组腺病毒包裹的shRNA-bcl-2，使用双酶切进行鉴定。2细胞培养：采用含15%胎牛血清的RPMI1640培养液培养人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83。3细胞转染及滴度测定：将腺病毒介导的shRNA真核表达载体shRNA-bcl-2（沉默组）和shRNA-HK（阴性对照）转染SACC-83细胞，沉默其bcl-2基因的表达（最佳腺病毒滴度MOI为腺病毒︰细胞=50:1）；未转染shRNA真核载体的SACC-83细胞（未转染组）作为空白对照。4bcl-2基因沉默效率的检测：采用Real-Time PCR技术，从mRNA水平检测基因沉默（RNAi）后SACC-83细胞中bcl-2基因的表达。5细胞凋亡检测：利用流式细胞术分别检测SACC-bcl-2细胞、SACC-HK细胞、SACC-83细胞凋亡情况。结果：1成功构建重组腺病毒包裹的shRNA真核表达载体shRNA-bcl-2.2腺病毒介导的shRNA真核表达载体shRNA-bcl-2转染SACC-83细胞的转染效率为98.18%；shRNA-HK转染SACC-83细胞的转染效率为94.10%。3基因转染48h后，Real-Time PCR时实定量检测发现，腺病毒介导的shRNA-bcl-2对SACC-83细胞中的bcl-2基因mRNA的沉默效率为90.19%。4流式细胞术检测SCCC-83-bcl-2组（沉默组）、SACC-83-HK组（空载体组）、SACC-83组（未转染组），细胞凋亡率分别为8.45±0.25、4.26±0.21和1.48±0.23，沉默组与空载体组和未转染组比较分别具有统计学意义（P＜0.05）。结论：1腺病毒介导的真核表达载体shRNA-bcl-2能够有效的沉默人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中的bcl-2基因mRNA的表达。2腺病毒介导的真核表达载体shRNA-bcl-2沉默bcl-2基因mRNA的表达后可以诱导SACC-83细胞的凋亡。