TIE2基因启动子及内皮抑素基因表达载体的构建

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sun200208
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目的:克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性。方法:设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luco报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、 HUVEC及NIT-1细胞系,48小时后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。结果:构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染四种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056~+1)具有较强的转录活性。结论:成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056~+1)具有较强的启动子活性。目的:构建小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet41b(+)一endostat in.方法:设计并合成引物,以重组质粒pUC57-endostatin为模板,PCR扩增获得小鼠及人类的内皮抑素基因。将扩增获得小鼠及人类的内皮抑素基因分别插入原核表达载体pet41b(+)中,构建小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet41b(+)-endostatin.通过转化大肠杆菌BL21(DE3)获得小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb(+)一endostatin的大量扩增,进行菌落PCR,挑选阳性菌液提取质粒进行酶切检测,并进行测序分析。结果:构建的小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb(+)一endostat in经酶切鉴定及测序分析都显示正确。结论:成功的构建了小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb (+)-endostatin.
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