不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞的增殖、凋亡的影响及初步机制研究

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背景胃癌是最常见的消化道肿瘤之一,死亡率高居消化道肿瘤第一位。胃癌化疗耐药性是造成胃癌治疗失败的主要原因。而化疗耐药与肿瘤微环境之间有着密不可分的联系,肿瘤微环境是诱发癌症化疗耐药的关键因素。目前国内外关于肿瘤酸性微环境与化疗药物耐药性的研究较少,本研究旨在体外实验条件下调节pH值水平观察多柔比星对胃癌BGC823细胞的增殖、凋亡的影响以及初步机制研究。目的本文的目的是明确不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞的增殖、凋亡的影响并分析其相关作用机制。方法在体外,用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)法检测多柔比星(ADM)对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC50)值,并确定ADM的合适实验浓度,检测不同pH值培养基培养的BGC823细胞在多柔比星干预下OD450(增殖活性)的变化;使用荧光显微镜观察培养状态下凋亡细胞的细胞核形态;使用流式细胞仪用Annexin V-FITC/PI法检测胃癌细胞BGC823凋亡率;采用实时定量荧光PCR法检测p-AKT,Bcl-2和NF-kB基因在胃癌细胞中的表达,对不同pH值条件下经多柔比星作用后的胃癌BGC823细胞之间上述实验结果进行统计学分析,进而明确不同pH值条件下ADM在胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的作用以及初步机制探讨。结果1.ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC50)值为5.277ug/ml,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC50值1/4倍浓度(即1.32ug/ml)用于进行后续实验;2.随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;3.随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;4.不同pH(pH6.87.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,Bcl-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低;结论升高细胞外pH值能明显提高ADM对胃癌BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤疗效可能通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。
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