【摘 要】
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当今世界我们面临着越来越严重的临床细菌感染,近些年大量耐药细菌及多重耐药细菌不断出现。细菌自发的耐药突变与抗生素的筛选及病原菌的环境适应能力,是临床耐药细菌和多重耐药细菌产生的基础。在实际生活中,最易产生细菌感染的就是伤口组织,人体皮肤是人类防御细菌入侵的第一道屏障,创伤患者由于皮肤的完整性被破坏,失去了作为屏障的功能,无法有效隔绝细菌,导致细菌获得入侵人体的快捷通道。同时,伤口遭到细菌感染,伤口
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当今世界我们面临着越来越严重的临床细菌感染,近些年大量耐药细菌及多重耐药细菌不断出现。细菌自发的耐药突变与抗生素的筛选及病原菌的环境适应能力,是临床耐药细菌和多重耐药细菌产生的基础。在实际生活中,最易产生细菌感染的就是伤口组织,人体皮肤是人类防御细菌入侵的第一道屏障,创伤患者由于皮肤的完整性被破坏,失去了作为屏障的功能,无法有效隔绝细菌,导致细菌获得入侵人体的快捷通道。同时,伤口遭到细菌感染,伤口的愈合速度首先受到影响,严重时细菌侵入血液循环,引起急性全身性感染危及患者生命。因此,如何快速识别并消除伤口细菌感染,降低创伤患者暴露在细菌环境的风险具有重大的研究意义。本课题以金纳米星(AuNS)为载体,在GKRWWKWWRR抗菌肽的C端引入明胶酶切割位点(PLGVR),N端引入金黄色葡萄球菌靶向识别肽(GLFVD),合成含抗菌肽序列及酶切序列的多肽GLFVDK(-Cy7)GKRWWKWWRRGPLGVRGC,通过金硫键将多肽与金纳米星偶联,制备AuNS-PEG-AMP。通常,该纳米材料不产生荧光,因为Cy7染料和AuNS核心之间存在荧光共振能量转移(FRET)。然而,在金黄色葡萄球菌感染的病理酶微环境中,AuNS和Cy7之间的PLGVR序列会被过表达的明胶酶切割,恢复Cy7的荧光,实现金黄色葡萄球菌感染的原位开启近红外荧光成像。此外,GLFVD可以显著增强纳米材料在金黄色葡萄球菌感染部位的靶向积累,并避免对周围健康组织的热损伤,从而增强纳米材料对金黄色葡萄球菌感染的伤口更特异性和局部化的光热治疗。结果:(1)材料表征结果表明AuNS-PEG-AMP纳米材料在水溶液中的分散性好,其水合粒径为201.3±3.7 nm。此外,纳米材料的粒径稳定性、光稳定性、光热效应及抗菌能力优异;(2)体外实验结果表明,靶向抗菌酶切多肽上的Cy7染料和AuNS核心之间存在荧光共振能量转移(FRET),Cy7荧光淬灭。而在金黄色葡萄球菌感染的病理酶微环境中,过表达的明胶酶会切割PLGVR序列,恢复Cy7的荧光,实现金黄色葡萄球菌感染的原位开启近红外荧光成像。此外,细菌生长曲线实验、细菌生物膜抑制/破坏实验及细菌live/dead染色实验证实AuNS-PEG-AMP纳米材料能够有效抑制细菌的生长。琼脂板细菌涂板实验证实AuNS-PEG-AMP纳米材料能够在混合菌种存在的微环境下对金黄色葡萄球菌产生特异性杀伤。体外细胞毒性实验表明,AuNS-PEG-AMP纳米材料生物相容性优异;(3)体内实验结果表明,将AuNS-PEG-AMP纳米材料用于金黄色葡萄球菌/大肠杆菌感染的小鼠伤口治疗,AuNS-PEG-AMP光照组的小鼠伤口面积相对于非光照组创口面积明显缩小。值得注意的是,AuNS-PEG-AMP纳米材料的靶向性证实其在金黄色葡萄球菌伤口治疗实验中的效果明显优于大肠杆菌伤口感染的治疗效果。
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