口蹄疫病毒的血清学检测与电镜观察

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将猪抗口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清经饱和硫酸铵提取IgG、Sephadex G-25层析纯化,并标记上异硫氰酸荧光黄(FITC),制备荧光抗体,检测BHK-21细胞中的FMDV抗原,结果表明:该方法可以检出BHK-21细胞中的病毒抗原,荧光抗体的工作浓度确定为1:40,且这种荧光能被FMDV阳性血清特异性地抑制。用制备的荧光抗体分别检测感染FMDV cs株和LB株的BHK-21细胞抹片和飞片,结果均为阳性,空白对照均为阴性。用纯化的IgG致敏绵羊红细胞,采用反向间接血凝试验(RIHA)检测FMDV标准阳性抗原,结果表明致敏红细胞活的力达1:960,具有特异性,探索了致敏红细胞的最佳实验条件,采用致敏红细胞对样本进行RIHA检测,阳性检出率为:水泡皮为80%(8/10)、细胞毒为94.7%(18/19)、感染乳鼠胴体毒为78%(14/18)。 通过接种BHK-21细胞传代增殖CS株和LB株FMDV,采用蔗糖反透析处理和SephadexG-200层析的方法浓缩和纯化的病毒液,将病毒抗原致敏绵羊红细胞以正向间接血凝试验(IHA)进行检测,所制备的致敏红细胞能与FMD阳性血清发生特异性凝集,且能被FMD标准阳性抗原特异性抑制,采用所制诊断液对贵州某养牛场17份血清待检样本进行了检测,阳性率为100%(17/17),对贵州某养猪场的20份血清样本进行检测,阳性率为100%(20/20);将上述病毒液采用蔗糖密度梯度离心进一步纯化,取30%~50%蔗糖区段的病毒液经透射电镜观察,FMDV完整病毒粒子呈均质、中心黑染、边缘整齐、无囊膜、界面清晰,直径为20~25nm的圆形颗粒。
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