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背景:辅助性T细胞(T helper cells,Th)22,可分泌功能因子白细胞介素(Interleukin,IL)-22,参与人体对抗感染性病原体的免疫防御过程,并在炎症与自身免疫性疾病的病理过程中发挥重要功能。然而,Th22细胞与SLE发病及其肾脏等器官损伤机制的关系尚未完全明确。目的:利用免疫学、分子生物学、细胞学等实验技术,进行体内和体外实验,1、明确SLE患者外周血Th22细胞的表达及分布,2、分析Th22细胞与SLE临床指标和肾脏等器官受累的相关性,3、明确Th22细胞在肾脏、皮肤组织分布和其靶细胞,4、探讨Th22细胞的分泌功能及Th22/IL-22对人系膜细胞(Human renal mesangial cells,HRMC)生长和炎症反应的潜在影响,探讨Th22细胞参与SLE肾脏损伤的可能机制。方法:1、通过流式细胞技术对67例SLE患者与26例健康对照外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)内的Th22细胞等Th细胞亚群的表达和分布进行相应的表型分析,并利用细胞内染色流式分析以及实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System,q PCR)对生成IL-22的Th22、Th17、Th1细胞亚群进行了功能分析和m RNA水平的验证。通过酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric bead array,CBA)测定外周血中IL-22、IL-17、IFN-γ和TNF-α的水平。2、引入SLE疾病活动度指数(SLE disease activity index,SLEDAI)、血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)、补体(Complements,C)、皮肤性狼疮疾病面积和严重程度指数(Revised Cutaneous Lupus Erythematosus Disease Area and Severity Index,RCLASI)、尿蛋白等临床指标,并根据肾脏和皮肤靶器官受累进行分组,进行亚组分析,研究Th22等Th细胞亚群与SLE进展和肾脏、皮肤等靶器官受累的相关性。随访应用激素联合环磷酰胺和(或)羟氯喹规范治疗的单独肾脏、皮肤受累患者,研究治疗后12周对Th22细胞数量和IL-22水平的影响。3、通过免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察狼疮肾炎(Lupus nephritis,LN)、狼疮皮损的组织标本中IL-22R1及Th22细胞的表达和分布情况。4、通过在体外模拟体内Th22细胞与靶细胞作用环境,建立Th22细胞与HRMC细胞transwell共培养体系,研究Th22细胞的分泌功能及Th22/IL-22对HRMC生长和炎症反应的影响。结果:1、流式细胞术发现,SLE患者外周血内的Th22细胞、Th17细胞以及Th17.1细胞水平明显升高;与健康对照相比,SLE患者IL-22+Th22细胞水平显著升高,IL-22+Th22细胞占Th22细胞的比率明显较健康对照升高。q PCR结果发现SLE患者外周血细胞中的IL-22m RNA、Th22细胞的特征转录因子Ah Rm RNA、Th17细胞的特征转录因子Rorcm RNA在相对转录水平明显升高,Th22细胞与IL-22m RNA、Th22细胞的特征性转录因子Ah Rm RNA相对转录水平呈正相关;Th17细胞与Th17细胞的特征性转录因子Rorcm RNA相对转录水平正相关;Th1细胞的水平与Th1细胞的特征性转录因子T-betm RNA相对转录水平正相关。SLE患者血浆中细胞因子IL-22、IL-17、IFN-γ及TNF-α的水平升高。血浆IL-22水平与Th22、IL-22+Th22细胞频率呈明显正相关。血浆IL-17水平和Th17细胞的频率呈明显正相关。2、临床指标相关性分析及亚组分析发现,SLE患者升高的Th22细胞等与SLEDAI等临床指标相关。单独皮肤受累的SLE患者较既无肾脏也无皮肤受累的SLE患者,Th22细胞水平明显升高,在单独皮肤受累的患者中升高的Th22细胞水平与皮损DAI和SI正相关,与血清免疫球蛋白Ig G正相关,与C3负相关;单独皮肤受累患者的血浆IL-22水平明显升高,并且升高的IL-22水平与Th22细胞频率以及SI指数相关。较非肾脏和皮肤受累的SLE患者,单独肾脏受累的患者Th22细胞与IL-22水平升高,并且Th22细胞频数与ESR相关。经12周规律免疫治疗后,单独皮肤受累和单独肾脏受累患者病情减轻,治疗后Th22细胞与IL-22水平下降。3、组织标本经免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察发现,LN患者病变肾脏小球内增殖的系膜细胞存在IL-22R1的表达,病变小球内系膜细胞周围Th22细胞浸润,病变中心组织内Th22细胞比例较正常对照增高。SLE合并皮肤损害患者的皮损区域角质形成细胞存在IL-22R1的表达,其周围有Th22细胞浸润,SLE皮损组织内Th22细胞数较正常对照增高。4、体外Th22细胞与HRMC细胞transwell共培养实验发现,接触培养时,Th22细胞产生IL-22的能力增强;Th22细胞主要是通过分泌IL-22诱导HRMC细胞增殖,不依赖细胞之间的接触;Th22细胞可通过分泌IL-22和与HRMC细胞接触两种方式诱导HRMC细胞分泌炎性因子IL-6和TNF-α。结论:1、SLE患者外周血Th22细胞水平增高,产生IL-22功能增强,并且与SLE肾脏损伤和皮损有关;2、免疫治疗后,LN和皮损患者外周血Th22细胞和IL-22水平下降;3、在LN和皮损病变组织中,Th22细胞局部浸润,可能通过直接接触和分泌IL-22两种方式,造成肾脏损伤;4、Th22细胞通过诱导HRMC细胞增殖和分泌IL-6、TNF-α参与LN发病。