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第一部分Rituximab耐药细胞株的构建目的：构建Rituximab耐药B细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1/R和Raji/R。方法：采用体外低浓度梯度递增法,将亲本Jeko-1、Raji细胞培养于含一定Rituximab浓度(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml)的细胞培养液中一定时间,利用流式细胞术测亲本细胞及耐药细胞表面CD20抗原表达,进而判断所培养的Jeko-1/R、 Raji/R细胞为Rituximab耐药细胞株,后将Jeko-1/R、Raji/R细胞培养于含50μg/ml浓度Rituximab的细胞培养液中培养,以维持其耐药表型。结果：流式细胞术测得亲本Jeko-1、Raji细胞表面CD20表达分别为99.9%、96.6%,而Rituximab耐药Jeko-1/R、Raji/R细胞表面CD20表达依次为0.3%、0.7%。结论：采用体外低浓度梯度递增法,成功构建Rituximab耐药细胞株Jeko-1/R、Raji/R,构建的耐药细胞株可作为研究Rituximab耐药机制的理想的细胞模型。第二部分利用基因表达谱芯片研究Rituximab耐药机制的初步研究目的：应用基因表达谱芯片技术初步探讨Rituximab耐药发生机制。方法：经流式细胞术判断Jeko-1/R和Raji/R细胞为Rituximab耐药细胞株后,提取亲本细胞及耐药细胞的总RNA,基因表达谱芯片技术分析每个样本的基因变化,找出耐药细胞株与亲本细胞株的差异表达基因,对差异表达较大的基因进行分析,同时利用KEGG数据库及DAVID软件进行后续生物信息学分析。结果：(1)与亲本细胞相比,在两株Rituximab耐药细胞株中同为上调(fold change≥2)和同为下调(fold change≤0.5)的差异表达基因分别为70、42个,而差异5倍以上(fold change≥5和fold change≤0.2)的基因仅有8个,为DNAJB1、EPB49、 HSPA2A、HSPA3A、HPSA6、PLXNA4、 RAPH1、BRWD1; (2) KEGG通路分析提示Rituximab耐药细胞与亲本细胞相比,MAPK信号通路呈富集；(3)GO分析提示耐药细胞生物学行为表现主要集中在抗凋亡、促增殖、血管发育等方面。结论：(1)与Rituximab耐药关系最密切的基因为DNAJB1、EPB49、HSPA2A、 HSPA3A、HPSA6、PLXNA4、 RAPH1、BRWD1;(2)与Rituximab耐药关系最密切的通路可能为MAPK信号通路,机制可能为Rituximab激活该通路后,抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖及促进肿瘤血管发育。该结果为将来预测Rituximab耐药及克服耐药,提供理论依据。