目的:通过研究醋柴胡及其组分对多种肝内药物转运蛋白的底物摄取活性、蛋白表达以及mRNA表达的影响,探讨醋柴胡引经作用的分子机制。方法:1.以MTT法检测醋柴胡及其组分对大鼠肝细胞BRL3A和人胚肾HEK293细胞增殖的影响,确定后续实验给药剂量。2.采用HPLC法测定BRL3A细胞内顺铂(Oct2和Mrp2的共同底物)的含量、BCA法测定样品蛋白浓度,按蛋白质浓度归一化计算单位蛋白的底物摄取量;另以RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对各BRL3A细胞中Oct2以及Mrp2 mRNA表达的影响;根据醋柴胡各组分对Oct2和Mrp2的调节作用,初步分析二者与醋柴胡引经作用之间的关系。3.HPLC法测定BRL3A细胞内牛磺胆酸钠(TCANa,Ntcp和Oatp2的共同底物)含量、BCA法测定蛋白浓度,按蛋白质浓度归一化计算摄取量;另分别采用Western Blot法和RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对BRL3A细胞中Ntcp和Oatp2的蛋白以及mRNA表达的影响;根据醋柴胡各组分对Ntcp和Oatp2的调节作用,初步分析二者与醋柴胡引经作用之间的关系。4.选用MRP1和Pgp的共同底物秋水仙碱作为检测指标,为排除MRP1的干扰作用,研究醋柴胡对HEK293细胞内Pgp蛋白的影响时,配伍MRP1抑制剂MK571进行;分别采用BCA法测定蛋白浓度,HPLC法测定细胞内秋水仙碱含量;按蛋白质浓度归一化计算摄取量。并分别采用Western Blot法和RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对细胞中Pgp的蛋白及mRNA表达的影响;根据醋柴胡各组分对Pgp的调节作用,初步分析正常细胞中Pgp与醋柴胡引经作用的之间关系。5.选择秋水仙碱作为MRP1摄取底物,研究醋柴胡对HEK293细胞内MRP1的影响时,配伍Pgp抑制剂维拉帕米以排除干扰。分别采用HPLC、Western Blot和RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对HEK293细胞摄取秋水仙碱以及对MRP1蛋白和mRNA表达水平的影响。另外,由于MRP1的转运功能有谷胱甘肽依赖性,另进行还原型谷胱甘肽(GSH,2 mM)刺激实验;分别采用HPLC、Western Blot和RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对HEK293细胞摄取秋水仙碱以及对MRP1蛋白和mRNA表达水平的影响。根据醋柴胡各组分对GSH诱导MRP1表达的HEK293细胞中MRP1的调节作用,分析醋柴胡对高表达MRP1的影响。并通过比较药物对正常细胞和高表达细胞影响的不同,分析MRP1与醋柴胡引经作用的之间关系。6.以RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对BRL3A细胞中胆盐输出泵Bsep、有机阴离子转运蛋白Oat1、Oat2和有机阳离子转运蛋白Oct1 mmRNA表达的影响;比较醋柴胡对不同转运蛋白mRNA表达的影响。7.采用化学转染试剂Mega Tran1.0将带有绿色荧光蛋白报告基因系统的质粒DNA导入人胚肾细胞HEK293细胞中,再加入氨基糖苷类抗生素(G418)8周,分别筛选出稳定高表达 0CT2、MRP2 和 Pgp 的 hOCT2-HEK293、hMRP2-HEK293 和 hPgp-HEK293细胞。并以流式细胞术和Western Blot、RT-PCR法测定各高表达细胞的转染效率以及相应转运蛋白的蛋白和mRNA表达。8.选择顺铂作为底物,采用HPLC法检测醋柴胡及其组分对hOCT2-HEK293细胞摄取顺铂的影响;并分别以Western Blot法和RT-PCR法测定药物对细胞中相应0CT2的蛋白及mRNA表达的影响;根据醋柴胡各组分对0CT2的调节作用,进一步分析高0CT2表达状态下,0CT2与醋柴胡引经作用之间的关系。9.选择顺铂作为底物,采用HPLC法检测醋柴胡及其组分对hMRP2-HEK293细胞摄取顺铂的影响;并分别采用Western Blot法和RT-PCR法测定药物对细胞中MRP2的蛋白及mRNA表达的影响;根据醋柴胡各组分对MRP2的调节作用,进一步分析高MRP2表达状态下,MRP2与醋柴胡引经作用之间的关系。10.选用罗丹明B作为Pgp底物,采用流式细胞术检测醋柴胡及其组分对hPgp-HEK293细胞摄取罗丹明B的影响;并分别采用Western Blot法和RT-PCR法测定醋柴胡及其组分对细胞中Pgp的蛋白和mRNA表达;根据醋柴胡各组分对Pgp的调节作用,进一步分析高Pgp表达状态下,Pgp与醋柴胡引经作用之间的关系。结果:1.给药剂量的确定根据MTT实验结果,选择对细胞增殖影响较小的浓度(半数抑制浓度IC50以下)进行后续实验。即BRL3A细胞的给药浓度为:醋柴胡水提液/VBRB(10mg.ml-1)、多糖部位/PSS(10mg.ml-1)、正丁醇部位/Buf(50mg.ml-1)、水溶性小分子部位/MHE(50 mg.ml-1)、柴胡皂苷 a/SSa(20 μ g.ml-1)、柴胡皂苷 b/SSb(100 μ g.ml-1)、柴胡皂苷 b2/SSb2(100 μ g.ml-1)、柴胡皂苷 c/SSc(50 μ g.ml-1)、柴胡皂苷 d/SSd(10 μg.ml-1)和赪桐甾醇/Cle(10 μg.ml-1)。而HEK293细胞给药浓度为:醋柴胡水提液/VBRB(10 mg.ml-1)、多糖部位/PSS(50mg.mml-1)、正丁醇部位/Buf(50mg.ml-1)、水溶性小分子部位/MHE(50mg.ml-1)、柴胡皂苷 a/SSa(20 μg.ml-1)、柴胡皂苷 b/SSb(50 μg.ml-1)、柴胡皂苷 b2/SSb2(50 μg.ml-1)、柴胡皂苷 c/SSc(50 μg.ml-1)、柴胡皂苷 d/SSd(10 μg.ml-1)和赪桐甾醇/Cle(50 μg.ml-1)。2.醋柴胡不同组分对顺铂摄取影响的方向不同。与对照组相比,VBRB(10 mg.mmL-1)、Buf(50mg.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)和 SSd(10 μg.mL-1)作用 24h 后,增加BRL3A细胞对顺铂的摄取幅度依次为:123.8%、146.6%、164.1%和49.7%,(P<0.01);而 PSS(10mg.mL-1)、SSb(100 μg-mL-1)、SSb2(100 μg.mL-1)降低摄取的幅度分别为:44.6%、45.2%、53.200%(P<0.05),MHE(50 mg.mL-1)和 Cle(10 μ g.mL-1)降低幅度为 56.1%、54.8%(P<0.01)。而与对照组相比,醋柴胡各组分作用24 h后均增加BRL3A细胞中Oct2的基因表达。VBRB(10 mg.mL-1)、SSd(10 μg.mL-1)和 Cle(10 μg.mL-1)依次增加细胞内0ct21 mRNA表达幅度为98.4%、60.3%和78.0%(P<0.05);而VBRB、PS1、Bu5、MHE、SSb2 和 Cle 组增加 Mrp2 mRNA 幅度依次为:184.1%、194.4%、169.1%、181.9%、233.5%和 262.9%(P<0.01),SSa 和 SSb 增加幅度为 60.4%和 141.6%(P<0.05)。3.除SSa、SSd和MHE组分外,醋柴胡各组分作用24 h后均增加BRL3A细胞摄取 TCANa 的活性。与对照组相比,VBRB(10mg.mL-1)、PSS(10 mg.mL-1)、Buf(50 mg.mL-1)、SSb2(100 μg.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)和 Cle(10 μg-mL-1)能增加细胞内TCANa的含量,增加幅度依次为:11.4%、17.8%、21.2%、29.6%、27.9%和24.9%(P<0.05);而MHE(50 mg.mL-1)作用24 h后则降低细胞内TCANa的含量,降低幅度为 23.0%(P<0.05)。而 SSa(20 μ g.mL-1)和 SSd(10 μ g.mL-1)不影响细胞摄取 TCANa。而醋柴胡对Ntcp基因表达的影响与其组分及浓度有关。与对照组相比,作用BRL3A细胞24h后,SSb2(100μg.mL-1)增加细胞内Ntcp蛋白的表达,幅度为18.3%(P<0.05);而 PSS(10 mg.mL-1)、MHE(50 mg.mL-1)、SSa(20 μg.mL-1)、SSc(50μ g.mL-1)、SSd(10 μ g.mL-1)和 Cle(10 μ g.mL-1)则降低细胞内 Ntcp 蛋白的表达,降低幅度分别为:29.4%、62.0%、28.8%、40.2%和 66.1%(P<0.05)。Buf(50 mg.mL-1)、SSb(100 μg.mL-1)、SSb2(100 μg.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)和 Cle(10 μg.mL-1)升高细胞内Ntcp mRNA表达,升高幅度依次为:34.9%、41.4%、146.3%、105.8%和73.4%(P<0.05),而PSS(10mg.mL-1)和MHE(50mg.mL-1)则降低细胞内Ntcp mRNA的表达,降低幅度分别为44.2%和52.3%(P<0.05)。另外,醋柴胡对0atp2蛋白表达的影响与其组分及浓度有关。与对照组相比,作用 BRL3A 细胞 24 h 后,SSb(100 μ g.mL-1)、SSb2(100 μ g.mL-1)、SSc(50 μ g.mL-1)和SSd(10 μg.mL-1)上调Oatp2蛋白表达,其中SSb2、SSc和SSd组上调幅度依次为:248.3%、270.8%和97.2%(P<0.05),SSb组上调481.5%(P<0.01);而MHE(50 mg.mL-1)则降低细胞内0atp2蛋白的表达,幅度为17.2%(P<0.05)。VBRB(10 mg.mL-1)、Buf(50mg.mL-1)、SSb(100 μg.mL-1)、SSb2(100 μg.mL-1)、和 Cle(10 μg.mL-1)增加细胞内0atp2 mRNA的表达,增加幅度依次为:66.2%、86.5%、42.0%(P<0.05),116.8%和 176.0%(P<0.01)。4.醋柴胡组分均降低HEK293细胞对秋水仙碱的摄取。与对照组相比,作用HEK293 细胞 24 h 后,VBRB(10 mg.ml-1)、PSS(50 mg.ml-1)、Buf(50 mg.ml-1)、MHE(50mg.ml-1)、SSa(20 μg.ml-1)、SSb(50 μg.ml-1)、SSb2(50 μg.ml-1)、SSc(50μg.ml-1)、SSd(10 μg.ml-1)和Cle(50 μg.ml-1)均降低细胞对秋水仙碱的摄取,差异显著(P<0.05);而与MRP1抑制剂MK571配伍后,PSS和SSa增加细胞HEK293细胞对秋水仙碱的摄取,增加幅度分别为:31.2%(P<0.05)和12.8%。其它各组均降低摄取,显示出对Pgp的活性促进作用;其中,VBRB(10mg.ml-1)、Buf(50mg.ml-1)、SSb(50 μg.ml-1)和SSd(10 μg.ml-1)组差异显著,P<0.05,降低的幅度依次为:14.8%、11.7%、21.1%和 28.9%。而醋柴胡不同组分对Pgp蛋白的影响不同。与对照组相比,作用HEK293细胞24 h 后,VBRB(10 mg.mL-1)、SSc(50 μg.ml-1)和 SSd(10 μg.ml-1)降低 Pgp 蛋白表达,降低幅度依次为:37%、34.6%和45.1%(P<0.05);而SSa(20 μml-1)、SSb(50 μg.ml-1)、SSb2(50 μg.ml-1)和 Cle(50 μg.ml-1)增加细胞中的 Pgp蛋白表达,幅度依次为:31.9%、111.0%、68.0%、82.8%(P<0.05);醋柴胡及其组分均对Pgp mRNA的表达影响无生物学意义。5.配伍Pgp抑制剂维拉帕米后,醋柴胡不同组分对Mrpl影响随组分而不同。与对照组相比,醋柴胡及其组分配伍Pgp抑制剂维拉帕米作用于HEK293细胞48h后:Buf(50 mg.mL-1)、SSa(20 μg.mL-1)、SSb2(50 μg.mL-1)均降低细胞秋对水仙碱摄取,降低幅度依次为:34.0%、21.4%和24.8%(P<0.05),其余组对摄取无影响;PSS(50mg.mL-1)增加细胞MRP1蛋白的表达,增加幅度为15.6%(P<0.05),而SSb(50 μg.mL-1)则降低MRP1的表达,降低幅度为:19.4%(P<0.05)。而醋柴胡及其组分对Pgp的mRNA表达影响较小,未能引起生物学意义上的表达改变。而谷胱甘肽作用条件下,醋柴胡对Mrp1影响显著增强。与对照组相比,醋柴胡及其组分配伍2mM的谷胱甘肽(GSH)作用于HEK293细胞48 h后:VBRB(10 mg.ml-1)和MRP1抑制剂MK571(50 μM)增加细胞摄取秋水仙碱的幅度分别为:92.7%和 75.6%(P<0.01);MHE(50mg.ml-1)、SSa(20 μ g.ml-1)、SSb2(50 μg.ml-1)和SSd(10 μg.ml-1)增加细胞摄取秋水仙碱的幅度依次为:30.6%、38.0%、51.4%和40.5%(P<0.05)。而VBRB降低细胞内45.6%的MRP1蛋白表达(P<0.05),SSd降低细胞内78.9%的MRP1蛋白表达(P<0.01);但对MRP1 mRNA表达的影响无生物学意义。6.醋柴胡及其组分作用于BRL3A细胞24 h后:(1)醋柴胡组分增加BRL3A细胞Bsep的基因表达。与对照组相比,除SSa和SSc外,VBRB各组分均增加BRL3A细胞Besp的基因表达;而VBRB(10mg.mL-1)、PSS(10 mg.mL-1)、Buf(50mg.mL-1)、MHE(50mg.mL-1)、SSb(100 μg.mL-1)、SSb2(100 u g.mL-1)均降低细胞中Besp mRNA的表达,差异显著(P<0.05);而SSa(20 μ g.mL-1)和SSc(50 μg.mL-1)则增加besp mRNA的表达,差异显著(P<0.05);但均无生物学意义。(2)醋柴胡组分增加BRL3A细胞Oat1的基因表达。与对照组相比,VBRB(10 mg.mL-1)、Buf(50 mg.mL-1)、MHE(50 mg.mL-1)、SSb(100 μ g.mL-1)、SSb2(100 μ g.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)和 Cle(10 μg.mL-1)均增加 BRL3A 细胞中 Oat1 mRNA 的表达,分别增加了:49.9%、86.9%、65.4%、92.7%、136.5%、77.43%和 95.3%(P<0.05)。(3)醋柴胡组分增加BRL3A细胞的0at2基因表达。与对照组相比,VBRB(10 mg.mL-1)、PSS(10 mg.mL-1)、Buf(50mg.mL-1)、SSa(20 μg.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)和Cle(10 μg.mL-1)均增加BRL3A细胞中Oat2mRNA的表达,依次增加了:245.7%、177.7%、291.2%、96.4%、77.6%(P<0.05)。(4)醋柴胡对Oct1的基因影响随成分不同而不同。与对照组相比,Buf(50 mg.mL-1)和SSa(20 μ g.mL-1)均降低BRL3A细胞中Oct1 mRNA的表达,分别降低了:57.2%和 51.3%(P<0.05);而 SSb(100μ g.mL-1)和 Cle(10μ g.mL-1)增加 Oct1 mRNA的表达,分别增加了:130.4%和104.6%(P<0.05)。7.稳定高表达OCT2、MRP2和Pgp的HEK293细胞株的构建与鉴定经 G418 筛选 8 周的 hOCT2-HEK293、hMRP2-HEK293、hPgp-HEK293、Vector 细胞(即转染pCMV6-AC-GFP质粒组细胞),流式细胞仪检测到的转染效率依次为:76%、69%、66%、82%;Western Blot实验结果显示:与Vector细胞组相比,稳定转染后的hOCT2-HEK293、hMRP2-HEK293、hPgp-HEK293 细胞依次升高了 OCT2、MRP2和 Pgp 的蛋白表达,而Vector组细胞中几乎不表达相应的OCT2、MRP2、Pgp蛋白;RT-PCR结果显示:与Vector组细胞中的OCT2、MRP2和Pgp mRNA相对表达量相比,hOCT2-HEK293、hMRP2-HEK293、hPgp-HEK293 细胞中的 mRNA 相对表达量依次为Vector 组的 3.21、4.07、2.99 倍。8.醋柴胡组分增加hOCT2-HEK293的摄取活性。与对照组相比,VBRB(10 mg.ml-1)、MHE(50 mg.ml-1)、SSa(20 μg.ml-1)、SSb2(50 μg.ml-1)、SSc(50μg.mL-1)、SSd(10 μg.ml-1)和Cle(50 μg.ml-1)增加了细胞对顺铂的摄取,依次增加了:54.7%、40.8%、15.0%、61.3%、49.2%、54.6%和 53.2%(P<0.05);而PSS(10 mg.ml-1)和 SSb(50 μg.ml-1)组则增加了:101.9%和 140.9%(P<0.01)。醋柴胡组分增加hOCT2-HEK293细胞株中0CT2的蛋白表达。Western Blot结果显示,VBRB、PSS、Buf、MHE、SSb、SSb2和SSd增加细胞OCT2的蛋白表达,依次增加了:190.9%、98.3%、53.2%、56.4%、13.8%、49.7%和 44.2%(P<0.05)。醋柴胡各组分还增加了 hOCT2-HEK293细胞株中OCT2的基因表达。VBRB、PSS、Buf SSa、SSb、SSb2、SSc、SSd、Cle 和 MHE 增加细胞 OCT2 mRNA 表达,依次增加了:91.8%、188.1%、166.0%、61.8%、47.1%、111.3%、67.0%和 121.0%和 132.4%(P<0.05),101.3%(P<0.01)。9.醋柴胡组分显著增加hMRP2-HEK293细胞对MRP2底物顺铂的摄取。与对照组相比,VBRB(10 mg.ml-1)、PSS(50 mg.ml-1)、MHE(50 mg.ml-1)、SSb(50 μ g.ml-1)、SSb2(50 μg.ml-1)、SSc(50 μg.ml-1)和 MK571(50 μM)细胞对顺铂的摄取均增加,增加幅度依次为:35.7%、49.9%、36.2%、58.5%、35.8%、44.3%和 19.5%(P<0.05)。而除SSc外,VBRB、SSb、SSb2和SSd降低细胞MRP2蛋白表达,依次降低:63.8%、42.5%、40.6%和 57.8%(P<0.05);而经 SSc(50 μg-ml-1)增加细胞 16.7%的MRP2蛋白表达(P<0.05)。另外,醋柴胡及其组分对MRP2mRNA的作用均较小,改变无生物学意义。10.醋柴胡各组分均增加hPgp-HEK293细胞中罗丹明B的摄取。与对照组相比,PSS(50mg.mL-1)组增加了 18.7%(P<0.05);VBRB(10mg.mL-1)Buf(50mg.mL-1)、MHE(50 mg.mL-1)、SSa(20 μg.mL-1)、SSb(50 μg.mL-1)、SSb2(50 μg.mL-1)、SSc(50 μg.mL-1)、SSd(10 μg.mL-1)、Cle(50 μg.mL-1)和维拉帕米(50μM)依次增加了:30.2%、27.7%、27.6%、17.8%、28.9%、42.4%、32.5%、41.6%、31.0%和 20.5%(P<0.01)。醋柴胡组分降低hPgp-HEK293细胞中的Pgp蛋白表达。Western Blot实验结果显示,MHE、SSa和SSc显著降低细胞Pgp蛋白表达,幅度依次为:67.8%、54.3%和49.0(P<0.01),而SSd和维拉帕米降低细胞Pgp蛋白表达,依次降低了:59.1%和47.1%(P<0.05)。醋柴胡及其组分抑制hPgp-HEK293细胞中PgpmRNA表达,但均无生物学意义上的改变。结论:1.醋柴胡增强大鼠正常肝细胞BRL3A对顺铂的摄取,可能与柴胡皂苷d上调了0ct2 mRNA表达和柴胡皂苷c下调Mrp2 mRNA表达有关;提示了上调0ct2和下调Mrp2可能是醋柴胡引经增效的作用机制,而柴胡皂苷c和柴胡皂苷d则是其作用的物质基础。而醋柴胡多糖部位、小分子水溶性部位、柴胡皂苷b、b2和赪桐甾醇抑制细胞对顺铂的摄取,则可能与它们上调了 Mrp2 mRNA的表达有关;提示了醋柴胡多糖部位、小分子水溶性部位、柴胡皂苷b、柴胡皂苷b2和赦桐甾醇可能与降低铂类抗肿瘤药物的肝脏毒性有关。2.醋柴胡增强肝细胞对胆汁酸盐的摄取,可能是醋柴胡正丁醇部位、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c和赪桐甾醇上调Ntcp表达,柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c和赪桐甾醇上调0atp2的共同结果;提示了上调Ntcp和0atp2可能是醋柴胡引经增效的作用机制,而柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c和赪桐甾醇为其作用的物质基础。而醋柴胡多糖部位虽促进细胞对底物的摄取,但与Ntcp和0atp2表达无关;原因有待进一步探讨。小分子水溶性部位呈现相反的作用——降低肝细胞对胆汁酸盐的摄取,并同时下调Ntcp和0atp2的表达,提示醋柴胡小分子水溶性部位有利于防止肝内胆汁淤积的发生。3.配伍MK571后,醋柴胡水提液降低正常细胞对秋水仙碱的摄取,分析原因可能与柴胡皂苷b、柴胡皂苷b2和赪桐甾醇促进细胞Pgp蛋白表达,降低秋水仙碱摄取有关;提示醋柴胡对正常细胞有一定的保护作用,促进正常细胞Pgp功能则可能是醋柴胡引经减毒的途径之一。而柴胡皂苷d促进摄取以及醋柴胡多糖部位抑制外排与影响Pgp表达无关。4.在无谷胱甘肽状态下,醋柴胡水提液降低细胞对秋水仙碱的摄取,分析与影响MRP1蛋白和mRNA的表达相关性较小;说明醋柴胡保护正常细胞是由其它途径所介导的。而加入谷胱甘肽后,细胞内MRP1的功能被激活;而醋柴胡水提液可增强细胞对秋水仙碱的摄取,分析原因可能与醋柴胡多糖部位、正丁醇部位、小分子水溶性部位、柴胡皂苷b2和柴胡皂苷d能通过下调MRP1功能、增强HEK293细胞对秋水仙碱的摄取有关;提示下调高表达MRP1功能可能是醋柴胡引经增效的作用机制之一。5.醋柴胡能促进正常肝细胞中Oat1以及Oat2 mRNA的表达,而对Bsep和Oct1 mRNA的表达影响作用不大。6.稳定高表达 0CT2、MRP2 和 Pgp 的 hOCT2-HEK293、hMRP2-HEK293、hPgp-HEK293细胞构建成功,可用于下一步药效筛选实验。7.在0CT2高表达状态下,醋柴胡增强hOCT2-HEK293细胞对顺铂的摄取,可能是通过醋柴胡多糖部位、正丁醇部位、小分子水溶性部位、柴胡皂苷a、柴胡皂苷b、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d和赪桐甾醇上调0CT2蛋白或mRNA表达有关;提示上调0CT2功能可能是醋柴胡引经增效的作用机制之一。8.在MRP2高表达状态下,醋柴胡水提液增强hMRP2-HEK293细胞对顺铂的摄取,原因可能是与柴胡皂苷b、柴胡皂苷b2和柴胡皂苷d下调MRP2蛋白表达有关;提示下调过表达MRP2是醋柴胡引经增效的作用机制之一。而醋柴胡多糖部位、小分子水溶性部位和柴胡皂苷c促进细胞对顺铂的摄取与MRP2蛋白、基因表达无关,原因有待进一步研究。9.在Pgp高表达状态下,醋柴胡水提液增强hPgp-HEK293细胞对罗丹明B的摄取,可能是与醋柴胡小分子水溶性部位、柴胡皂苷a、柴胡皂苷c和柴胡皂苷d下调Pgp蛋白表达有关;提示下调Pgp功能是醋柴胡也能增效的作用机制之一。综上所述,醋柴胡可通过上调0CT2、Ntcp、0atp2功能增加底物的肝摄取,通过下调高表达MRP1、MRP2和Pgp功能降低对底物的排出;醋柴胡通过影响药物转运蛋白而改变其它药物的体内分布从而达到增效减毒的作用。推测醋柴胡引经作用可能是其中多种成分共同作用于多种药物转运蛋白的综合结果,而对转运蛋白的影响可能是其引经作用的机理之一。