背景：雌二醇（Estradiol，E2）是一种甾体类雌激素，由于可以促进动物生长并且可以提高畜禽瘦肉比，曾经广泛应用于畜禽养殖业，残留于动物组织内的雌二醇通过食物链进入人体，通过干扰内分泌系统的功能危害人体健康。因此，发展简便、快速、灵敏的检测雌二醇残留的方法非常有必要。与其他检测技术相比，免疫分析方法较适合现场检测，但是免疫分析方法的建立首先是制备高特异性抗体，制备雌二醇的高特异性抗体对于其免疫方法的建立尤为重要。目的：制备T7噬菌体尾蛋白P11并制备其多克隆抗体，筛选其单克隆抗体，并将所制备的抗体应用于噬菌体展示抗体库的筛选，从噬菌体展示天然人源抗体库中筛选单链抗体（single chain antibody），并实现其在大肠杆菌体内的表达，并对筛选得到的单链抗体进行性质鉴定。方法：1.以T7select10-3b为模板扩增P11蛋白基因片段，鉴定其序列的正确性后进行原核表达，大量纯化P11蛋白；免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。2.根据P11蛋白的氨基酸序列设计3条抗原表面多肽，免疫Balb/c小鼠，当其效价不再升高时进行细胞融合，筛选P11蛋白的单克隆抗体。3.采用固相筛选法和差减筛选法从T7噬菌体展示天然人源抗体库中筛选针对雌二醇的特异性抗体，而后采用噬菌体ELISA筛选针对雌二醇的特异性重组噬菌体，PCR扩增结合活性较好的重组噬菌体基因序列，构建表达载体pTIG-TRX-ScFv，实现单链抗体的表达及纯化。结果：1.以T7select10-3b为模板，成功扩增出P11蛋白基因片段，测序结果与NCBI数据库相符，成功构建表达载体pTIG-TRX-P11，于大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，SDS-PAGE鉴定在约25KDa处有加强带，与预期大小相符，且表达蛋白存在于菌体破碎后上清。2.利用亲和层析柱纯化P11蛋白，SDS-PAGE鉴定P11蛋白得到了明显浓缩，大量制备的纯度较高的P11蛋白，经BCA蛋白定量后用于免疫新西兰大白兔，六次免疫后采血制得抗P11蛋白抗血清，辛酸-硫酸铵沉淀法纯化多克隆抗体，SDS-PAGE鉴定纯化后多克隆抗体纯度较好，BCA蛋白定量抗体浓度为6.3mg/mL，抗体效价为1:32,000。3.经HPLC和ESI-MS鉴定合成的三条多肽正确，采用多肽-BSA免疫Balb/c小鼠，其效价达到1:32,000时，进行细胞融合和单克隆抗体的筛选，最后，筛选得到特异识别P11-3表位多肽的的P11蛋白单克隆抗体，并制备其腹水型单克隆抗体，采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后经SDS-PAGE鉴定，结果显示纯化效果较好，BCA蛋白定量抗体浓度为3mg/mL，抗体效价为1:64,000。4.采用固相筛选和差减筛选的方法对T7噬菌体人源抗体库进行了四轮筛选，采用噬菌体ELISA测定重组噬菌体对雌二醇的结合活性，结果显示：5株重组噬菌体的结合活性较好。5.扩增完成5株结合活性较好的重组噬菌体的基因序列，并成功构建表达载体pTIG-TRX-ScFv，SDS-PAGE鉴定在约25KDa处出现表达加强带，经Western blot鉴定，ScFv得到了表达。6.将诱导表达破碎后上清经ELISA和竞争ELISA鉴定其对雌二醇的具有特异性结合活性且具有竞争活性，其中三株较好，我们采用亲和层析柱纯化此三个单链抗体，获得了纯度较高的纯化制品。结论：1.完善了噬菌体展示抗体库平台：原核表达P11蛋白成功，并且制备了其多克隆抗体，经Western blot鉴定，多克隆抗体可以识别重组P11蛋白和T7噬菌体。筛选得到了可以特异性识别P11-2多肽表位的P11蛋白的单克隆抗体。这些抗体应用到了噬菌体展示抗体的筛选。2.从T7噬菌体展示天然人源抗体库中筛选得到了5株特异性识别雌二醇的阳性重组噬菌体，经间接ELISA和竞争ELISA对表达的单链抗体进行鉴定，结果显示：对雌二醇具有特异性结合活性且具有竞争活性。