研究目的:常染色体显性多囊肾病（ADPKD）是最常见的遗传性肾病,也是导致终末期肾病的主要因素之一。多囊肾病的主要表现为双侧肾囊肿进行性扩增,挤压周围正常肾组织,并最终导致肾功能衰竭。目前ADPKD囊肿发生的具体分子机制尚不清楚,而且缺乏有效的治疗手段。c AMP-PKA信号通路的异常活化促进了ADPKD的囊肿发生,CREB是c AMP-PKA通路下游重要的转录因子,目前CREB在ADPKD中的作用尚不明确。本研究旨在明确CREB在ADPKD中的功能,探究其发挥作用的分子机制,并探讨以CREB作为靶点治疗ADPKD的可能性。研究方法:1.通过蛋白免疫印迹技术检测小鼠肾组织和原代细胞中CREB以及磷酸化CREB的蛋白水平,通过免疫染色技术明确CREB在发病肾组织中的分布情况。同时结合临床样本,进一步明确CREB与ADPKD之间的相关性。2.利用A-CREB转基因小鼠探讨抑制CREB的转录活性对ADPKD疾病进程的影响,通过检测肾体重比、肾囊肿指数、血浆中尿素氮含量等指标以评估A-CREB在ADPKD中的作用效果。3.采用CREB的抑制剂666-15对ADPKD小鼠模型进行药物干预,评估药物靶向CREB的转录活性对ADPKD的治疗效果,并探讨长期注射666-15是否对小鼠产生毒副作用。4.利用染色质免疫共沉淀测序技术明确磷酸化CREB在囊肿细胞基因组上的分布,同时联合RNA测序分析,探讨CREB促进囊肿发生的分子机制,并通过motif分析找到可能与CREB一起参与囊肿发生相关基因的转录调控的转录因子,阐释CREB在ADPKD中的转录调控机制。结果:首先,我们发现磷酸化CREB水平在肾囊肿细胞中是显著升高的,并且CREB经典靶基因的转录水平也显著增加。随后,我们利用过表达的A-CREB实现了对小鼠体内CREB转录活性的抑制,对ADPKD疾病进程有明显缓解作用,表明CREB调控的靶基因促进了ADPKD疾病进程。我们选用666-15作为CREB的抑制剂对ADPKD小鼠模型进行药物干预,结果表明666-15可以有效缓解ADPKD疾病进程,并改善小鼠肾功能,同时,未发现有明显毒副作用。最后,我们利用RNA-seq和Ch IP-seq技术,结合生物信息学分析,明确了磷酸化CREB在ADPKD中所调控的基因,以及潜在的可以与CREB一同发挥转录调控功能的转录因子。结论:磷酸化CREB通过激活囊肿发生相关基因的转录促进了ADPKD的发生发展,通过抑制CREB转录活性可以有效缓解ADPKD的疾病进程。