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J亚群禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类造血组织中某些细胞成分过度增生的肿瘤性疾病。我国自1999年首次在肉鸡中发现ALV-J,之后迅速传入蛋鸡、地方品种鸡,导致我国养殖业遭受巨大经济损失。2013年之后,虽在我国蛋鸡中禽白血病的发生率明显降低,但在地方品种鸡及进口白羽肉种鸡中仍造成危害严重。目的:本研究通过对我国部分地方品种鸡和进口白羽肉种鸡ALV-J的分子流行病学调查及致病性研究,为掌握其流行趋势、分子特征及致病性奠定基础。方法:本研究采用病毒分离培养、ELISA抗原检测及多重PCR等方法进行病毒分离鉴定;采用PCR方法扩增分离株全基因组,并进行序列测定;利用多种序列分析软件对分离株全基因组序列与参考株序列进行比较分析;进一步对地方品种鸡及进口白羽肉种鸡ALV-J分离株腹腔注射1日龄SPF鸡,感染后的第1、2、3、5、7、9、11、13、15周采集泄殖腔棉拭子、抗凝血、血清,进行排毒、病毒血症和ALV-J特异性抗体检测;每次采样时同时随机剖解部分鸡,进行病理变化观察。结果:(1)2013~2018年,本研究从5个省份10个鸡场采集病料(疑似ALV感染)260份,从中分离鉴定到18株地方品种ALV-J分离株。序列特征如下:全基因组序列分析表明变异主要集中于gp85、3`UTR、3`LTR等基因。gp85氨基酸分析表明,少数分离株(3/18)与ALV-J肉鸡毒株关系密切;还有部分分离株(3/18)与蛋鸡毒株关系密切;但多数分离株(9/18)与本地鸡毒株亲缘关系较近,形成独立分支。大部分ALV-J分离株的3`UTR的rTM缺失,保留了完整的E元件;U3区出现9 bp碱基替换;18个分离株中,仅G266与所有参考株的同源性均低于90%,对其进行致病性研究发现,第6天开始出现排毒(15%),之后在各个时期排毒率上下波动较大,病毒血症在第7W后维持较高水平,感染后15W内均未检测到抗体产生。(2)2018年以来,本研究从辽宁、山东等地发病进口白羽肉种鸡鸡场采集6批疑似禽白血病病料样品55份,分离到8株ALV-J分离株,并对其进行全基因组测序及分析。序列特征如下:8个分离株的gp85均与其他ALV-J参考株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高且处于同一分支。3’UTR在rTM和DR-1区连续缺失210 bp,E元件缺失125 bp,与GD14J2一致。3’LTR U3区序列与GD14J2毒株的同源性较高,为94.3%~~96.3%。致病性研究发现,感染后第10天开始出现排毒,第2W检测到病毒血症,阳性率为100%,之后在不同时期不断变化,波动较大,感染后15W内一直诱导产生低水平的抗体。结论:(1)2013-2018年期间,从我国部分地方品种鸡中分离与鉴定了18株ALV-J;多数分离株在gp85、U3区已进化出独立遗传分支,在3`UTR区保留了完整的E元件及U3区发现9个独特的碱基替换。G266感染SPF鸡后,没有诱导机体产生抗体,但有持续的病毒血症,出现间歇性排毒。(2)确定了2018年以来我国进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病原为ALV-J;序列分析表明,引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J可能与GD14J2分离株为同一来源,故推测本研究进口白羽肉种鸡ALV-J由进口国外白羽祖代肉种鸡引入;致病性研究发现,感染组SPF鸡诱导了低水平的抗体,出现了间歇性的病毒血症及排毒。以上研究为分析ALV-J在我国部分地区地方品种鸡及进口白羽肉种鸡中的变异趋势及来源提供有用的数据资料。