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目的：骨桥蛋白(OPN)是一种分泌型的磷酸化糖蛋白，在许多肿瘤中表达增高，并且与肿瘤的侵袭转移相关。我所前期研究发现OPN在肝细胞癌(HCC)转移中发挥重要作用。本研究应用RNA干扰技术降低细胞内OPN的表达水平，进一步研究OPN对人肝癌细胞侵袭性的影响，并初步探讨OPN调控肝癌转移的作用机制。方法：应用Real-TimePCR检测具有同一遗传背景但不同转移潜能的人肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H以及HCC-LM3中OPN的表达情况。体外化学合成OPN序列特异性双链RNA(OPNi．1和OPNi-2)，转染高转移肝癌细胞系(HCC-LM3)，应用Real-TimePCR和Westernblot分别检测经RNA干扰后，OPNmRNA和蛋白表达水平的变化，筛选能特异性抑制细胞内OPN表达的siRNA。利用特异性抑制OPN表达的siRNA转染高转移肝癌细胞系HCC-LM3后，通过三个体外实验观察肝癌细胞恶性生物学行为的改变：MTT实验检测细胞增殖情况，克隆形成实验和Matrigel侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。为探讨OPN影响肝癌细胞侵袭能力的作用机制，应用ELISA实验检测siRNA转染后细胞分泌的侵袭相关因子：金属蛋白酶MMP-2、MMP-9和肝细胞生长因子(HGF)在细胞上清液中的蛋白水平变化，并应用Real-TimePCR同时检测细胞内HGF在mRNA水平上的改变。为进一步寻找与OPN作用相关的分子和可能的信号通路，应用含有21,400个基因的全基因组芯片扫描特异性抑制OPN的细胞标本与对照细胞之间基因表达谱的差异。结果：MHCC97-L、MHCC97-H以及HCC-LM3三株细胞系转移侵袭潜能逐渐增高，其细胞内OPN表达水平也相应增高。转染特异性抑制OPN的siRNA(OPNi-2)后，细胞内OPN的RNA水平降低79％，蛋白水平下降81％。体外实验表明，与空白对照组及非特异性siRNA转染组相比，转染OPNi-2抑制细胞内OPN的表达后，HCC-LM3细胞的生长速度有所减慢，但与对照组相比没有显著性差异(P>0．05)。克隆形成实验和Matrigel侵袭实验结果显示，与空白对照组细胞相比，HCC-LM3细胞转染OPNi-2后，克隆形成数目下降49％(P=0．005)，穿过人工基底膜的细胞数也明显减少(P=0．001)。ELISA实验结果显示，转染OPNi-2后，细胞分泌的MMP-2减少(P=0．017)，但MMP-9没有明显的变化(P=O．193)；同时，OPN被特异性抑制后，HCC-LM3细胞分泌的HGF蛋白含量明显减少(P=0．007)，但细胞内HGFmRNA水平却没有明显的改变。OPN表达被特异性抑制的细胞样品和对照细胞之间的基因表达差异显著，共发现135个表达有显著性差异的基因，其中下调基因106个，上调基因29个。结论：不同侵袭转移潜能的HCC细胞系中OPN表达与其侵袭性高低呈正相关。OPNi-2可以特异性抑制高转移肝癌细胞系(HCC-LM3)内OPN的表达。通过转染OPNi-2降低OPN的表达，可显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。OPN可能是通过调节HGF和MMP-2的表达分泌，从而参与影响肝癌细胞的侵袭转移能力。RNA干扰技术抑制OPN表达后，高转移肝癌细胞系HCC-LM3的基因表达谱发生了明显的变化。这很可能是肝癌细胞内OPN的表达降低后，高转移肝癌细胞的侵袭转移能力产生改变的原因。