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电磁脉冲（electromagneticpulse，EMP）作为脉冲式电磁辐射，与连续波相比具有更明显的生物学效应，其对机体健康的影响日益引起关注。眼是EMP照射的敏感效应器官，血-视网膜屏障（blood-retinalbarrier，BRB）的限制性通透性维持视网膜内环境的稳定，从而保证视网膜功能的正常发挥。前期实验表明，一定参数的EMP照射引起BRB通透性增加，但该效应的时效规律及分子机制尚不清楚。本研究旨在确立一定参数的EMP照射引起BRB通透性增加的时效规律，研究紧密连接蛋白作为BRB重要的结构和功能单位在该生物效应中的变化，并从丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase，MAPK）信号通路切入，初步探讨该生物效应中可能的分子机制。在体实验，以成年雄性Sprague–Dawley（SD）大鼠为研究对象，以伊文思蓝（Evans Blue，EB）染料及内源性白蛋白为示踪剂，采用视网膜铺片法、EB定量检测法及白蛋白免疫印迹杂交法（WesternBlot）检测EMP（200kV/m，200次）照射后大鼠BRB通透性的变化。视网膜铺片显示：假辐照组血管走行清楚，无EB渗漏；EMP照射后0.5小时（h），视网膜局部血管出现EB渗漏，血管结构尚清楚；照射后3h、6h多视野EB渗漏，渗漏程度及数目均较0.5h组增加，渗漏区血管结构不清；照射后12hEB渗漏量开始逐渐减少，血管结构渐清楚。EB定量检测显示：与假辐照组相比，EMP照射后0.5h，渗漏的EB染料含量增高；照射后3h、6h，EB渗漏值达高峰；照射后12h，EB渗漏值开始降低；照射后48h，EB渗漏量与假辐照组比较无差异。白蛋白WesternBlot结果显示：与假辐照组相比，白蛋白渗漏量于照射后0.5h开始上升，3h、6h达高峰，12h开始下降。明确EMP致BRB开放的时效规律后，采用WesternBlot法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin及claudin-5，结果显示：照射后各时间点ZO-1表达量与假辐照组比较均无差异。与假辐照组比较，照射后3h、6h组occludin表达量下调；照射后0.5h、3h、6h、12h组claudin-5表达量下调。采用WesternBlot法检测MAPK信号通路的相关信号分子：p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK及p-ERK。检测结果显示：与假辐照组比较，EMP照射后各时间点p38、JNK、ERK表达量均无变化，照射后0.5h，p-p38、p-JNK、p-ERK表达量均上调。离体实验部分以RF/6A（恒河猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞）为研究对象。采用transwell小室共培养RF/6A与C6（大鼠胶质瘤细胞）建立血视网膜内屏障（innerBRB）的体外模型，并检测EMP（200kV/m，200次）照射对该屏障通透性的影响。通透性的检测指标为跨内皮电阻抗（transendothelialelectricalresistance，TEER）及辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）透过率。结果显示：EMP照射后0.5h、3h、6h，TEER值较假辐照组降低，HRP透过率较假辐照组增高。二者结果表明EMP照射后，BRB内屏障体外模型通透性呈现先增高后恢复的趋势。采用WesternBlot法检测RF/6A细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-5及ZO-1的表达量，结果显示：与假辐照组比较，EMP照射后0.5h、3h、6h，occludin及claudin-5蛋白表达量下调；EMP照射后各时间点，ZO-1表达量与假辐照组比较均无统计学差异。采用WesternBlot法检测MAPK信号通路相关蛋白p-p38、p-HSP27、p-JNK以及p-ERK等。检测结果显示：EMP照射后0.5h，与假辐照组比较p-p38、p-HSP27、p-JNK以及p-ERK表达量上调。为进一步研究EMP照射引起BRB开放的分子机制，以特异性抑制剂SB203580、SP600125及U0126分别选择性p38-MAPK、JNK及MEK1/2，阻滞p38、JNK及ERK1/2信号分子的磷酸化，并以WesternBlot法检测RF/6A紧密连接蛋白occludin及claudin-5表达量。检测结果显示：使用p38抑制剂SB203580预处理组，EMP照射所致occludin及claudin-5蛋白表达下调被阻滞；另两组抑制剂预处理组未能阻滞EMP照射所致occludin及claudin-5蛋白表达量下调。由此证明，p38-MAPK信号通路参与诱导EMP照射所致BRB通透性增加的生物学效应。本研究结果表明，EMP（200kV/m，200次）照射导致BRB通透性可逆性增加，p38-MAPK信号通路通过磷酸化的形式调控紧密连接跨膜蛋白occludin及claudin-5的表达量，从而调节BRB的通透性。