目的：　　 旨在替代传统Draize皮肤刺激检测在全球已经开展了很多年，尤其在欧盟范围内。欧洲替代方法验证中心((ECVAM)已经批准推荐了一项应用组织工程皮肤代替体外皮肤刺激试验的指南。在我国，很少有机构从事这项研究。我们研究工作的成功实施，将填补国内组织工程领域的此项空白。在本研究中，按照已经成功构建了一种新的组织工程表皮模型，按照ECVAM的标准，结构上，对表皮模型的微观结构进行了分析研究；在功能上，对表皮模型能不能区分化学品受试物有无刺激性做了研究。　　 方法：　　 1．首先需要分离，培养，传代，冻存和复苏角质形成细胞，本实验室经过长时间的摸索确定以0.25％分离酶Ⅱand0.125％胰酶两步消化法来获取原代角质形成细胞，0.125％胰酶消化法进行细胞传代，KSFM冻存细胞。　　 2．使用角质形成细胞在聚碳酸膜上气液面培养13天构建组织工程表皮模型，培养基为添加了氯化钙和抗坏血酸的Epilife培养基，通过各种浓度SDS(从0.1％到0.5％)快速渗透试验作用18小时(37℃、5％CO2)，PBS漂洗干净，MTT法测定化学物对细胞活性的影响，评价所建组织工程皮肤模型的屏障能力　　 3．依照ECVAM指南进行组织工程表皮的验证性试验，标准为液体25μl/cm2、固体25mg/cm2(用水湿润后)均匀地与模型表面接触作用15min后，PBS漂洗，洗去作用的化学物质，5％CO2、37℃的条件下孵育42hr，MTT法检测细胞活性，结果依照标准进行判定，此外，还可以检测IL-α作为辅助检测指标，进行最终化学物质刺激性的判定。　　 结果：　　 本研究中所使用的改进的体外获取、扩增表皮细胞的方法啊，能有效为组织工程表皮模型的构建提供足够的细胞。经过13天13天获得组织工程表皮。这种层化培养获得的组织工程表皮在组织学上和人的表皮结构特征相似，可以分为四层：基底层，棘层，颗粒层，角质层，角质层具有的基本脂质颗粒可以提高表皮对化学刺激物质的耐受能力，应用十二烷基硫酸钠(SDS)所进行的快速渗透试验所做的对比研究就说明了这点，本研究中所构建的模型应用SDS试验后的半抑制数IC50是0.171％±0.106×10-3，在应用20种化学物质所做的刺激性试验，所构建的组织工程表皮模型的准确性是和敏感性是70％和90％。应用IL-α作为辅助检测指标后，可以提高准确性和敏感性，达到90％和90％。